El pKa y el pH desempeñan un papel importante en el desarrollo del método de cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC). La selección del pH adecuado utilizando el pKa de moléculas ionizables a menudo produce picos agudos simétricos en HPLC.
Las propiedades físico-químicas de un analito tienen un papel importante en el desarrollo del método HPLC. El desarrollo del método cromatográfico requiere estudiar las propiedades físicas de la molécula del fármaco como la solubilidad, la polaridad, el pKa y el pH. Tanto el pH como el pKa son factores muy importantes en el desarrollo del método HPLC.
La acidez o basicidad de una molécula se define normalmente por el valor del pH. Escoger un pH adecuado para una molécula ionizable a menudo produce picos agudos y simétricos en HPLC. Los picos simétricos y agudos son esenciales para conseguir tiempos de retención reproducibles, desviaciones estándar relativas bajas entre inyecciones y límites de detección bajos. La acidez de una solución acuosa de muestra se determina por la concentración de iones (H3O+). Por tanto, el pH de la solución especifica la concentración de iones de hidrógeno en la solución.
El pKa es una característica de un analito particular y describe cómo el compuesto deja fácilmente un protón. El tampón tiene la capacidad de mantener el pH; se basa en la concentración de tampón y el pKa del agente tampón. Tenga en cuenta que la mayor capacidad de amortización se produce en el valor pKa. Para HPLC, la regla general se utiliza habitualmente para ajustar el pH de la fase móvil o tampón, cuyo rango ajustable es de ± 1 unidad de pH para el pKa del ion tampón. Si el valor de pKa de los componentes es muy cercano al valor de pH de la fase acuosa de la fase móvil, obtenemos tiempos de retención inestables. El pH de la fase móvil debe ser inferior al valor de pKa, esto es para suprimir la ionización allí para evitar picos divididos.
