Cómo Hacer Tampón TBE en 3 Sencillos Pasos

El tampón TBE (Tris-borato-EDTA) es una solución tampón compuesta de base Tris, ácido bórico y EDTA (ácido etilendiaminotetraacético). Este tampón se usa a menudo para electroforesis en gel de agarosa en el análisis de productos de ADN que resultan de amplificación por PCR, protocolos de purificación de ADN o experimentos de clonación de ADN.

Usos de TBE

El tampón TBE es particularmente útil para la separación de fragmentos de ADN más pequeños (PM & lt; 1000), tales como productos pequeños de digestiones con enzimas de restricción. TBE tiene una mayor capacidad de almacenamiento en memoria intermedia y proporcionará una resolución más nítida que la memoria intermedia TAE. El tampón TAE (Tris-acetato-EDTA) es una solución compuesta de base Tris, ácido acético y EDTA.

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El TBE es generalmente más caro que el TAE e inhibe la ADN ligasa, lo que puede causar problemas si se pretenden etapas posteriores de purificación y ligación del ADN. Con los tres sencillos pasos que siguen, aprenda a hacer búfer TBE. No debería tardar más de 30 minutos en crearse.

Lo Que Necesitas

Para hacer tampón TBE, necesitarás solo cuatro sustancias. Los elementos restantes en esta lista son equipos. Las cuatro sustancias requeridas son sal disódica de EDTA, base Tris, ácido bórico y agua desionizada.

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En cuanto al equipo, necesitará un medidor de pH y estándares de calibración, según corresponda. Además, querrás vasos de precipitados o matraces de 600 mililitros y 1500 mililitros. Para completar sus necesidades de equipo, se encuentran cilindros graduados, barras de agitación y placas de agitación.

Verifique el inventario en el laboratorio que usará para asegurarse de tener todo lo que necesita antes de comenzar. No hay nada peor que tener que detenerse en medio de la preparación de una solución porque se ha quedado sin los materiales adecuados.

Si su laboratorio está en la escuela o en su lugar de trabajo, consulte con el personal adecuado para asegurarse de que tengan todos los artículos en existencia. Hacerlo puede ahorrarle tiempo y energía al final.

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Solución Madre de EDTA

Se debe preparar una solución de EDTA con anticipación. El EDTA no entrará completamente en la solución hasta que el pH se ajuste a aproximadamente 8,0. Para una solución madre de 500 mililitros de EDTA 0,5 M, pesar 93,05 gramos de sal disódica de EDTA (FW = 372,2). Luego se disuelve en 400 mililitros de agua desionizada y se ajusta el pH con NaOH (hidróxido de sodio). Después de eso, rellene la solución hasta un volumen final de 500 mililitros.

Solución Madre de TBE

Preparar una solución madre concentrada (5x) de TBE pesando 54 gramos de base Tris (FW = 121,14) y 27,5 gramos de ácido bórico (FW = 61,83) y disolviendo ambos en aproximadamente 900 mililitros de agua desionizada. A continuación, añadir 20 mililitros de EDTA 0,5 M (molaridad, o la concentración) (pH 8,0) y ajustar la solución a un volumen final de 1 litro. Esta solución se puede almacenar a temperatura ambiente, pero se formará un precipitado en soluciones más antiguas. Almacene el tampón en botellas de vidrio y deséchelo si se ha formado un precipitado.

Solución de Trabajo de TBE

Para la electroforesis en gel de agarosa, se puede usar un tampón de TBE a una concentración de 0,5 x (dilución 1: 10 de la solución madre concentrada). Diluir la solución madre 10 veces en agua desionizada. Las concentraciones finales de soluto son Tris-borato 45 mM y EDTA 1 mM (milimolar). El tampón está ahora listo para su uso en la ejecución de un gel de agarosa.