¿Cuál es la diferencia entre FPLC y HPLC?

Que diferencia principal FPLC y HPLC es que la FPLC es un tipo de cromatografía líquida que purifica biomoléculas grandes como proteínas, nucleótidos y péptidos, mientras que la HPLC es un tipo de cromatografía líquida que separa compuestos de pequeño peso molecular.

La cromatografía líquida es una técnica utilizada para separar una muestra en sus componentes individuales. Esta separación ocurre debido a la interacción de muestras específicas con las fases móvil y estacionaria. Los componentes dentro de una muestra se separan según la afinidad de cada componente por la fase móvil en la cromatografía líquida. A medida que la fase móvil y la muestra pasan a través de una columna, los componentes de la muestra comienzan a separarse en bandas que pueden detectarse mediante espectroscopia UV-VIS. Por lo tanto, FPLC y HPLC son dos tipos de técnicas de cromatografía líquida.

CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia clave
2. ¿Qué es la FPLC?
3. ¿Qué es HPLC?
4. Similitudes - FPLC y HPLC
5. FPLC vs. HPLC en forma tabular
6. Resumen: FPLC frente a HPLC

¿Qué es FPLC?

FPLC es un tipo de cromatografía líquida que purifica biomoléculas grandes como proteínas, nucleótidos y péptidos. Que cromatografía líquida rápida de proteínas (FPLC) fue desarrollado y comercializado por primera vez en Suecia en 1982 por Pharmacia. A menudo se utiliza para analizar o purificar mezclas de proteínas. Esto se basa en el principio de la afinidad de los componentes de la muestra con un líquido en movimiento (fase móvil) y un sólido poroso (fase estacionaria). En FPLC, la fase móvil es un tampón y la fase estacionaria es una resina en perlas. Por lo general, consiste en agarosa reticulada empaquetada en una columna cilíndrica de vidrio o plástico.

Figura 01: Aparato FLPC (cromatografía líquida de proteínas rápidas)

La resina de intercambio iónico se utiliza en la mayoría de las estrategias de FLPC. Por lo tanto, la proteína de interés se unirá a la resina a través de una interacción de carga. La técnica FLPC también utiliza dos tampones: el tampón 1 (el tampón de ejecución) y el tampón 2 (el tampón de elución). A medida que la mezcla de tampón y muestra pasan a través de la columna, la proteína de interés en la mezcla primero se une a la resina a través de una interacción de carga. Sin embargo, la proteína de interés se disocia y vuelve a la solución en el tampón de elución cuando el tampón de elución pasa a través de la columna al final del proceso. Posteriormente, la solución (eluyente que contiene la proteína de interés) se pasa a través de dos detectores que miden la concentración de sal y la concentración de proteína. A medida que eluye cada proteína, aparece como un "pico" durante la detección y se puede recolectar para su uso posterior.

¿Qué es HPLC?

HPLC es un tipo de cromatografía líquida que separa compuestos de bajo peso molecular. En 1969, Waters Corporation, EE. UU., fabricó comercialmente la primera HPLC. En la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), una mezcla de muestras (analito) en un solvente (fase móvil) se bombea a través de una columna de material de relleno cromatográfico (fase estacionaria) a alta presión. La mezcla de muestra se transporta en una corriente móvil de gas portador de helio o nitrógeno.

Figura 02: HPLC (cromatografía líquida de alta resolución)

Los componentes de la mezcla de muestra que interactúan menos con la fase estacionaria o interactúan más con la fase móvil salen de la columna más rápido. Por otro lado, los componentes de la mezcla de muestra que interactúan más con la fase estacionaria o interactúan menos con la fase móvil saldrán de la columna más lentamente. Según el principio de interacción anterior, los componentes de la mezcla de muestra se pueden separar. Además, el detector del instrumento identifica cada componente de la mezcla de muestra que sale de la columna. La HPLC se utiliza para examinar muestras ambientales y biológicas en busca de presencia o ausencia de compuestos conocidos, como fármacos, toxinas o pesticidas. Se utiliza en diversas industrias, como la farmacéutica, ambiental, forense y química.

¿Cuáles son las similitudes entre FPLC y HPLC?

1. FPLC y HPLC son tipos de cromatografía líquida.
2. Ambos se utilizan para separar e identificar muestras biológicas.
3. Tienen una fase móvil líquida y una fase estacionaria sólida.
4. Ambas técnicas utilizan una columna para pasar la muestra.
5. Estas técnicas utilizan bombas, detectores, válvulas y software para la separación y detección de muestras.

¿Cuál es la diferencia entre FPLC y HPLC?

FPLC es un tipo de cromatografía líquida que se utiliza para purificar biomoléculas grandes como proteínas, nucleótidos y péptidos. HPLC es un tipo de cromatografía líquida utilizada para separar compuestos de bajo peso molecular. Entonces, esta es la principal diferencia entre FPLC y HPLC. Además, FPLC utiliza monitores de pH y conductividad y colectores de fracciones. Por el contrario, HPLC no utiliza monitores de pH y conductividad ni colectores de fracciones.

La siguiente infografía enumera otras diferencias entre FPLC y HPLC en forma tabular.

Resumen: FPLC frente a HPLC

La cromatografía es una técnica de análisis de laboratorio utilizada para separar los componentes de una mezcla. Se divide en diferentes tipos como B. Cromatografía en columna, cromatografía de gases, cromatografía líquida, cromatografía de intercambio iónico, etc. FPLC y HPLC son dos tipos de técnicas de cromatografía líquida. FPLC es un tipo de cromatografía líquida que se utiliza para purificar biomoléculas grandes como proteínas, nucleótidos y péptidos. Por otro lado, HPLC es un tipo de cromatografía líquida utilizada para separar compuestos de bajo peso molecular. Entonces, este es el resumen de cuál es la diferencia entre FPLC y HPLC.

Relación:

1. "Cromatografía líquida de proteína rápida". News-Medical.net, 25 de enero de 2019.
2. "¿Qué es HPLC/cromatografía líquida de alto rendimiento?" Entrenamiento de laboratorio, 11 de mayo de 2021.

Imagen de cortesía:

1. "Aparato de cromatografía" por Giac83 - Trabajo propio (CC BY-SA 2.5) a través de Commons Wikimedia
2. "HPLC" por Sam.F. – Trabajo propio (CC BY-SA 3.0) a través de Commons Wikimedia