¿Cuál es la diferencia entre los ensayos colorimétricos y fluorométricos?

Que diferencia principal entre ensayos colorimétricos y fluorométricos es que el ensayo colorimétrico determina la concentración de compuestos coloreados en una solución, mientras que el ensayo fluorométrico determina el mecanismo cinético de una solución.

Un ensayo bioquímico es una técnica que detecta o cuantifica analíticamente la actividad de una molécula o sustancia biológica. Es un in vitro Proceso. Los ensayos colorimétricos y los ensayos fluorométricos son dos tipos de ensayos bioquímicos comunes que se realizan en los laboratorios. Varias técnicas como ELISA y Western Blot también son ensayos bioquímicos complejos para cuantificar la actividad metabólica y medir el comportamiento funcional de biomoléculas como proteínas, enzimas y otras moléculas pequeñas. Estos tipos de ensayos se utilizan para identificar interacciones proteína-ADN, proteína-ARN y proteína-proteína.

CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia clave
2. ¿Qué es un ensayo colorimétrico?
3. ¿Qué es un ensayo fluorométrico?
4. Similitudes: ensayo colorimétrico y fluorométrico
5. Ensayos colorimétricos frente a fluorométricos en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es un ensayo colorimétrico?

Un ensayo colorimétrico es una técnica que determina la concentración de compuestos coloreados en una solución. En otras palabras, un ensayo colorimétrico es una reacción que produce un cambio de color debido a una reacción enzimática o química entre los reactivos y los analitos. Los ensayos colorimétricos se practican en bioquímica para detectar enzimas, compuestos específicos, hormonas, anticuerpos y otros analitos. Utilizan colorímetros o espectrofotómetros. Los colorímetros son instrumentos que caracterizan muestras coloreadas para proporcionar una medida objetiva de las propiedades del color. Un espectrofotómetro es un dispositivo que mide la intensidad de la luz en función del color o la longitud de onda de la luz.

Figura 01: Ensayo colorimétrico

¿Cómo funciona un ensayo colorimétrico?

En un ensayo colorimétrico, se prepara una placa con un anticuerpo específico unido a los pocillos. Luego se agrega la muestra. Esto permite que la muestra se una al anticuerpo. Luego se agregan un anticuerpo de detección y un sustrato a los pocillos para que reaccionen con la sonda de detección. La solución de parada se agrega al final antes de la lectura. Sin la muestra, queda un pozo vacío llamado blanco. Cuanto más oscuro es el color en el ensayo colorimétrico, mayor es la concentración de analito. Normalmente solo se necesita una longitud de onda para realizar la medición. Pero cuando hay una medida de referencia, se utilizan dos o más longitudes de onda.

¿Qué es un ensayo fluorométrico?

El ensayo fluorométrico es una técnica que determina el mecanismo cinético de las reacciones enzimáticas. Un ensayo fluorométrico ocurre con la formación de un producto fluorescente a partir de un sustrato no fluorescente o y viceversa. Este ensayo también utiliza la transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET), en la que la reacción enzimática cambia la posición de dos fluoróforos en el sustrato, cambiando así la intensidad de la fluorescencia.

Figura 02: Ensayo fluorométrico

Los ensayos fluorométricos son generalmente mucho más sensibles que otros ensayos. Las estimaciones enzimáticas de diagnóstico en muestras de tejidos, células o fluidos de pacientes mejoran debido a su mayor sensibilidad.

¿Cómo funciona un ensayo fluorométrico?

En un ensayo fluorométrico, se agrega un sustrato a la muestra en la placa y la respuesta fluorescente se registra utilizando el lector de placas. Aquí cada celda se mide por separado. Las placas opacas se utilizan en ensayos fluorométricos. Esto reduce la dispersión de la luz. Se requieren dos longitudes de onda para este tipo de ensayo. Una longitud de onda se usa para detectar la excitación y la otra longitud de onda para detectar la emisión.

¿Cuáles son las similitudes entre los ensayos colorimétricos y fluorométricos?

• El ensayo colorimétrico y el ensayo fluorométrico son dos tipos de ensayos bioquímicos.
• Ambos ensayos se realizan para diagnósticos médicos.
• Estos ensayos implican una reacción enzimática.
• Ambos ensayos implican un sustrato y analitos.

¿Cuál es la diferencia entre los ensayos colorimétricos y fluorométricos?

Un ensayo colorimétrico es una técnica que determina la concentración de compuestos coloreados en una solución, mientras que un ensayo fluorométrico es una técnica que determina el mecanismo cinético de las reacciones enzimáticas. Entonces, esta es la diferencia clave entre los ensayos colorimétricos y fluorométricos. Además, los ensayos fluorométricos son más sensibles que los ensayos colorimétricos; por lo tanto, los ensayos fluorométricos tienen la capacidad de detectar más analitos. Por lo tanto, esta es otra diferencia importante entre los ensayos colorimétricos y fluorométricos. Además, los ensayos fluorométricos requieren dos longitudes de onda, mientras que los ensayos colorimétricos se realizan con una longitud de onda.

La siguiente infografía enumera otras diferencias entre los ensayos colorimétricos y fluorométricos.

Resumen: ensayo colorimétrico frente a fluorométrico

Un ensayo bioquímico es un método analítico para determinar y cuantificar reacciones metabólicas celulares. El ensayo colorimétrico y el ensayo fluorométrico son dos tipos de ensayos bioquímicos. El ensayo colorimétrico es una reacción que produce un cambio de color debido a una reacción enzimática o química entre los reactivos y los analitos, mientras que el ensayo fluorométrico es una técnica utilizada para determinar el mecanismo cinético de las reacciones enzimáticas. Ambos ensayos dependen de una reacción enzimática que involucra un sustrato y un analito. Los ensayos fluorométricos son más sensibles que los ensayos colorimétricos. Lo que es más importante, los ensayos fluorométricos requieren dos longitudes de onda, mientras que los ensayos colorimétricos se pueden realizar con una sola longitud de onda. Por lo tanto, esto resume la diferencia entre los ensayos colorimétricos y fluorométricos.

Relación:

1. "Ensayos colorimétricos". Ciencias Experimentales de la Vida.
2. "Ensayos de enzimas fluorométricas". Enzimas creativas.

Imagen de cortesía:

1. "Ensayo colorimétrico" por Sepehr Ehsani (CC BY-NC-ND 2.0) a través de Flickr
2. "Fluorímetro" por Matthias M. - Trabajo propio (CC BY 3.0) a través de Commons Wikimedia