Diferencia entre gradiente de sacarosa y ultracentrifugación en cojín de sacarosa

Que diferencia principal La ultracentrifugación se encuentra entre el gradiente de sacarosa y el colchón de sacarosa. la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa utiliza un gradiente de sacarosa continuo, mientras que la ultracentrifugación en cojín de sacarosa utiliza un gradiente de sacarosa discontinuo.

La ultracentrifugación en gradiente de sacarosa y en cojín de sacarosa son dos tipos similares de técnicas utilizadas para separar tipos específicos de macromoléculas. Ambas técnicas utilizan un gradiente de densidad de sacarosa. Sin embargo, la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa utiliza un gradiente de densidad continuo, mientras que la ultracentrifugación en cojín de sacarosa utiliza un gradiente de densidad discontinuo.

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CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia clave
2. ¿Qué es la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa?
3. ¿Qué es la ultracentrifugación en cojín de sacarosa?
4. Similitudes entre gradiente de sacarosa y ultracentrifugación en cojín de sacarosa
5. Comparación directa: gradiente de sacarosa frente a ultracentrifugación en cojín de sacarosa en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa?

La ultracentrifugación en gradiente de sacarosa es una técnica que se puede utilizar para fraccionar macromoléculas como ADN, ARN y proteínas. Hay varios pasos en esta técnica. Son preparación en gradiente de sacarosa, centrifugación, separación y elución. La preparación del gradiente es el paso clave en esta técnica. En esta técnica, la muestra, que contiene macromoléculas de diferentes tamaños, se coloca en capas sobre la superficie de una columna de gradiente de sacarosa. Durante la centrifugación, las macromoléculas de diferentes tamaños sedimentan a través de la columna de gradiente de sacarosa a diferentes velocidades. La sedimentación depende de varios factores que incluyen la fuerza de centrifugación, el tamaño, la forma y la densidad de las macromoléculas, la densidad y la viscosidad del gradiente. Al final de la centrifugación, las macromoléculas se separan espacialmente por densidad. Las macromoléculas más grandes (macromoléculas de alta densidad) sedimentan en el fondo. Los más ligeros (macromoléculas de baja densidad) permanecen en la parte superior del gradiente. Por lo tanto, las moléculas se separan como bandas distintas. Luego, las bandas deben separarse y debe realizarse la purificación de la macromolécula específica de la sacarosa.

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Figura 01: ultracentrifugación en gradiente de sacarosa

Por el lado de la aplicación, este método se usa ampliamente para el fraccionamiento de moléculas de ADN. La ultracentrifugación en gradiente de sacarosa se usa comúnmente para caracterizar el tamaño y la composición del complejo proteico. Además, esta técnica se utiliza para la purificación parcial de mRNA.

¿Qué es la ultracentrifugación en cojín de sacarosa?

La ultracentrifugación en cojín de sacarosa es otra técnica que permite el fraccionamiento de macromoléculas. A diferencia de la ultracentrifugación en gradiente de densidad de sacarosa, la ultracentrifugación en cojín de sacarosa utiliza un gradiente de densidad discontinuo. La concentración de sacarosa aumenta en pasos discretos de arriba a abajo. En esta técnica, la separación se logra agregando el extracto clarificado a un pequeño volumen de solución de sacarosa en un tubo de centrífuga llamado colchón de sacarosa. Esto permite una mejor separación en la centrifugación de alta velocidad. Cuando las moléculas se separan como una banda entre el colchón de sacarosa, la banda blanca se puede recoger y limpiar. Además, los contaminantes se pueden eliminar aún más utilizando el método de colchón de sacarosa. Con el método del cojín de sacarosa, el 60-70 % del tubo puede llenarse con la muestra. Por lo tanto, el método del cojín de sacarosa permite procesar un mayor volumen de muestra.

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¿Cuáles son las similitudes entre la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa y la ultracentrifugación en cojín de sacarosa?

• La ultracentrifugación en gradiente de sacarosa y en cojín de sacarosa son dos técnicas utilizadas para separar una mezcla de macromoléculas.
• Ambos métodos utilizan un gradiente de sacarosa.
• La centrifugación es un paso en ambos métodos.
• Con cada método, las moléculas sedimentan como una banda o zona.

¿Cuál es la diferencia entre la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa y la ultracentrifugación en cojín de sacarosa?

La ultracentrifugación en gradiente de sacarosa es una técnica que utiliza un gradiente de sacarosa continuo en el tubo de centrífuga, mientras que la ultracentrifugación en cojín de sacarosa es una técnica que utiliza un gradiente de sacarosa discontinuo. Entonces, esta es la diferencia clave entre el gradiente de sacarosa y la ultracentrifugación de cojín de sacarosa.

Además, la ultracentrifugación en cojín de sacarosa permite procesar un volumen de muestra más grande, mientras que la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa permite procesar un volumen de muestra comparativamente pequeño.

La siguiente infografía enumera otras diferencias entre el gradiente de sacarosa y la ultracentrifugación en cojín de sacarosa.

Resumen: gradiente de sacarosa frente a ultracentrifugación en cojín de sacarosa

La ultracentrifugación en gradiente de sacarosa separa las macromoléculas utilizando un gradiente continuo de sacarosa. Por el contrario, la ultracentrifugación en cojín de sacarosa utiliza un gradiente discontinuo de sacarosa para separar un tipo específico de partícula en una mezcla. Entonces, esta es la diferencia clave entre el gradiente de sacarosa y la ultracentrifugación de cojín de sacarosa. El método del cojín de sacarosa permite la recolección de partículas morfológicamente intactas porque no causa estrés mecánico, a diferencia de la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa, que empuja las moléculas hacia el fondo del tubo. Además, la ultracentrifugación en cojín de sacarosa permite procesar un volumen de muestra mayor que la ultracentrifugación en gradiente de sacarosa.

Relación:

1. Dijkstra, Jeanne y Cees P. de Jager. "Centrífuga en gradiente de densidad". SpringerLink, Springer, Berlín, Heidelberg, 1 de enero de 1998, disponible aquí.

Imagen de cortesía:

1. "Gradiente de densidad" - Mlw3559 en Wikilibros en inglés. – Transferido de en.wikibooks a Commons. (CC BY-SA 2.5) a través de Commons Wikimedia