Diferencia entre la traducción de Nick y el relleno final

Que diferencia principal entre la traducción del tono y el relleno final se encuentra que La traducción de mellas es un proceso que crea sondas de ADN marcadas para diversas reacciones de hibridación, mientras que el relleno final es una técnica que crea fragmentos romos al agregar nucleótidos en salientes monocatenarios.

Nick Translation y End Filling son dos técnicas utilizadas en biología molecular. La traducción de Nick se utiliza para marcar sondas para la hibridación para detectar secuencias de nucleótidos específicas. End Filling se usa para hacer fragmentos romos que tenían extremos pegajosos con voladizos de una sola hebra. Ambas técnicas son de gran importancia y se realizan de forma rutinaria en los laboratorios de investigación molecular.

CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia clave
2. ¿Qué es la traducción de Nick?
3. ¿Qué es el relleno final?
4. Similitudes entre la traducción de Nick y el relleno final
5. Comparación lado a lado: traducción de Nick frente a relleno final en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es la traducción de Nick?

La traducción de Nick es una técnica importante para preparar sondas marcadas para diversas técnicas de biología molecular, como transferencia, en el sitio hibridación, fluorescente en el sitio Hibridación, etc. Es un in vitro Método de marcado de ADN. Las sondas de ADN se utilizan para identificar secuencias específicas de ADN o ARN. Con la ayuda de una sonda marcada, se pueden marcar o visualizar fragmentos específicos de una mezcla compleja de ácidos nucleicos. Por lo tanto, las sondas marcadas se fabrican utilizando diferentes técnicas. La traducción de Nick es uno de esos métodos que produce sondas marcadas utilizando las enzimas ADNasa 1 y ADN polimerasa 1.

El proceso de traducción de mella comienza con la actividad de la enzima ADNasa 1. La ADNasa 1 inserta mellas en el esqueleto de fosfato del ADN de doble cadena al romper los enlaces fosfodiéster entre los nucleótidos. Una vez que se crea la muesca, se produce el grupo 3'-OH libre del nucleótido y la enzima ADN polimerasa 1 actúa sobre él. La actividad de exonucleasa de 5' a 3' de la ADN polimerasa 1 elimina los nucleótidos de la muesca hacia la dirección 3' de la cadena de ADN.

Al mismo tiempo, la actividad polimerasa de la enzima ADN polimerasa 1 funciona y agrega nucleótidos para reemplazar los nucleótidos eliminados. Si los nucleótidos están etiquetados, el reemplazo se produce con los nucleótidos etiquetados y etiquetan el ADN para su identificación. Finalmente, este ADN marcado recién sintetizado puede usarse como sonda en diversas reacciones de hibridación.

¿Qué es el relleno final?

End Filling es una técnica utilizada en biología molecular para crear fragmentos romos. La digestión por restricción produce fragmentos con salientes. Estos fragmentos pueden no ser compatibles para ligarse en vectores plasmídicos. Los vectores a menudo se truncan para permitir que se unan los extremos incompatibles. Por lo tanto, los fragmentos con salientes se pueden hacer romos añadiendo los nucleótidos a la cadena complementaria, utilizando el saliente como plantilla para la polimerización. Este proceso se denomina llenado final.

Las ADN polimerasas como el fragmento Klenow de la ADN polimerasa I y la ADN polimerasa T4 catalizan el llenado final. Agregan nucleótidos para completar (5′ → 3′) y masticar (3′ → 5′). Una vez que se llenan los extremos adhesivos, se vuelven romos y se pueden ligar en un vector.

Además, el relleno final se puede utilizar para marcar moléculas de ADN. Sin embargo, solo se puede usar para etiquetar moléculas de ADN con extremos cohesivos. En comparación con la traducción de muescas, el relleno de extremos es un método más suave que rara vez conduce a roturas de ADN.

¿Cuáles son las similitudes entre la traducción de Nick y el relleno final?

• Tanto la traducción de muescas como el relleno final son técnicas de biología molecular.
• Se pueden utilizar para marcar sondas.
• Ambos son in vitro

¿Cuál es la diferencia entre Nick Translation y End Filling?

La traducción de Nick es una técnica que genera sondas marcadas para la hibridación. Por el contrario, el relleno final es una técnica que crea fragmentos romos para ligarlos en vectores. Entonces, esta es la principal diferencia entre la traducción de nick y el relleno final. Además, la traducción de muescas requiere el uso de actividad de exonucleasa de 5' a 3', mientras que el llenado final no requiere actividad de exonucleasa de 5' a 3'.

Resumen - Traducción de Nick vs. Relleno final

La traducción de Nick es un método que incorpora nucleótidos marcados radiactivamente en el ADN. Sintetiza sondas marcadas basadas en las actividades de DNase 1 y E. coli enzimas ADN polimerasa 1. El relleno de extremos, por otro lado, es una técnica que crea fragmentos romos. Si los fragmentos tienen extremos pegajosos (salientes monocatenarios), es necesario embotarlos para unirlos en vectores. El relleno de extremos agrega nucleótidos compatibles y crea fragmentos de extremos romos para hacerlos compatibles para la ligadura. Por lo tanto, esto resume la diferencia entre la traducción de nick y el relleno final.

Relación:

"Mezcla: NEB." New England Biolabs: reactivos para la industria de las ciencias de la vida, disponible aquí.
"Traducción de Nick: una descripción general". Sciencedirect.Com, 2020, disponible aquí.

Imagen de cortesía:

1. "PESCADO (hibridación fluorescente in situ)" por MrMatze - Trabajo propio (CC BY-SA 3.0) a través de Commons Wikimedia

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