5 tipos de microscopios
Hay principalmente 5 tipos comunes de microscopios de la siguiente manera:
- Microscopio de luz o de campo óptico
- Microscopio de campo oscuro
- Microscopio de contraste de fase
- microscopio de fluorescencia
- microscopio electronico
Un buen microscopio debe tener tres propiedades:
- Buena resolución: El poder de resolución se refiere a la capacidad de producir imágenes separadas de objetos cercanos para que puedan distinguirse como dos entidades separadas. El poder de resolución de:
- El ojo humano solo mide aproximadamente 0,2 mm (200 μm)
- El microscopio óptico mide aproximadamente 0,2 μm.
- Un microscopio electrónico mide aproximadamente 0,5 nm.
La resolución depende del índice de refracción. El aceite tiene un índice de refracción más alto que el aire.
- Buen contraste: Esto se puede mejorar aún más tiñendo la muestra.
- Buen aumento: Esto se logra mediante el uso de lentes cóncavas.
Tecnología de enzimas
El microscopio óptico o de campo brillante forma una imagen oscura sobre un fondo más brillante.
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Principio: En un microscopio de campo oscuro, el objeto aparece brillante contra un fondo oscuro. Esto es posible gracias al uso de un condensador especial de campo oscuro.
Aplicaciones: Se utiliza para identificar células vivas no teñidas y bacterias delgadas, como las espiroquetas, que no se pueden ver con un microscopio óptico.
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Se utiliza para visualizar células vivas creando una diferencia de contraste entre las células y el agua. Convierte ligeras diferencias en el índice de refracción y la densidad celular en cambios fácilmente detectables en la intensidad de la luz.
Es útil para estudiar:
- motilidad microbiana
- Determinación de la forma de las células vivas.
- Detección de componentes bacterianos como endosporas y cuerpos de inclusión.
Principio: Cuando los tintes fluorescentes se exponen a los rayos ultravioleta (UV), se excitan y se dice que son fluorescentes, lo que significa que convierten estos rayos invisibles de longitud de onda corta en luz de longitud de onda más larga (luz visible).
Aplicaciones: El microscopio de epifluorescencia tiene las siguientes aplicaciones:
- Autofluorescencia, cuando se coloca bajo una lámpara UV, por ejemplo ciclospora
- Los microbios recubiertos con el tinte fluorescente, p. naranja de acridina para los parásitos de la malaria (QBC) y fenol auramina para Tuberculosis M..
- Inmunofluorescencia: utiliza un anticuerpo marcado con colorante fluorescente para detectar antígenos de la superficie celular o anticuerpos unidos a antígenos de la superficie celular. Hay tres tipos: IF directa, IF indirecta y citometría de flujo.
Fue inventado por Ernst Ruska en 1931. Se diferencia de un microscopio óptico en varios aspectos.
Hay dos tipos de EM:
- transmisión electromagnética (Tipo MC, examina la estructura interna, resolución 0.5nm, ofrece una vista bidimensional)
- escaneo EM (superficies de examen, resolución de 7 nm, proporciona una vista tridimensional)
Principio del microscopio electrónico de transmisión (TEM)
Preparación de la muestra: Las celdas se someten a los siguientes pasos para preparar muestras muy finas (de 20 a 100 nm de espesor)
- Fijación: Las células se fijan utilizando glutaraldehído o tetróxido de osmio para la estabilización.
- Deshidración: A continuación, la muestra se deshidrata con disolventes orgánicos (por ejemplo, acetona o etanol).
- Incrustación: La muestra se incorpora a un polímero plástico y luego se cura para formar un bloque sólido. La mayoría de los polímeros plásticos son insolubles en agua; por lo tanto, se requiere una deshidratación completa de la muestra antes de su inclusión.
- Rodaja: Luego, la muestra se corta en rodajas finas con un cuchillo de ultramicrótomo y las rodajas se montan en un portaobjetos de metal (cobre).
Técnica de congelación: Es un método alternativo de preparación de muestras para visualizar orgánulos internos dentro de las células.
Las células se congelan rápidamente, luego se calientan → se fracturan con un cuchillo que expone los orgánulos internos → se someten a sublimación → se cubren con platino y carbono.
Las medidas para aumentar el contraste de EM incluyen:
- Tinción con soluciones de sales de metales pesados como citrato de plomo y acetato de uranilo
- Tinción negativa con metales pesados como ácido fosfotúngstico o acetato de uranilo.
- Sombreado: La muestra se recubre con una película delgada de platino u otro metal pesado en un ángulo de 45 ° para que el metal golpee al microorganismo en un solo lado.
