¿Cuál es la diferencia entre Golden Gate y Gibson Assembly?

Que diferencia principal entre Golden Gate y Gibson Asamblea es que Golden Gate se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular que se clonará, mientras que Gibson Assembly no se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular que se clonará.

Durante las últimas décadas, los científicos moleculares han desarrollado varios procedimientos estandarizados que permiten ensamblar más fácilmente múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza. Por lo tanto, los métodos de clonación como la ligadura de enzimas de restricción, la clonación de puerta de enlace, el ensamblaje de Gibson, el ensamblaje de Golden Gate y la clonación TOPO son ampliamente utilizados por los investigadores en experimentos científicos. Por lo tanto, Golden Gate y Gibson Assembly son dos métodos de clonación molecular que permiten ensamblar múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza.

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CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia clave
2. ¿Qué es la Asamblea Golden Gate?
3. ¿Qué es Gibson Assembly?
4. Similitudes - Golden Gate y Gibson Assembly
5. Golden Gate vs. Gibson Assembly en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es la Asamblea Golden Gate?

Golden Gate es un método de clonación molecular que facilita el ensamblaje de múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza. Este método se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular que se va a clonar. Se originó en 1996. Esta técnica utiliza enzimas de restricción Tipo IIS y ADN ligasa T4. Estas enzimas cortan el ADN fuera de los sitios de reconocimiento. Pueden crear voladizos no palindrómicos. Por lo tanto, se pueden ensamblar múltiples fragmentos de ADN usando combinaciones de secuencias salientes.

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Figura 01: Puerta Dorada

Procedimiento de montaje de Golden Gate

La técnica Golden Gate consta de tres pasos principales en su proceso:

• generación de voladizos en el vector de clonación,
• Ensamblaje de múltiples insertos de ADN mediante el uso de secuencias específicas de fragmentos en voladizos y
• Ligadura.

El ensamblaje Golden Gate utiliza vectores de clonación circulares (vector objetivo). Además, este método elimina el sitio de restricción del producto ligado para realizar la digestión y la ligadura simultáneamente. Un protocolo de ciclo térmico típico de Golden Gate oscila entre 37 °C y 16 °C, ya que 37 °C es óptimo para las enzimas de restricción y 16 °C es óptimo para las ligasas.

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¿Qué es la Asamblea Gibson?

Gibson Assembly es un método de clonación molecular que permite ensamblar múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza. A diferencia del método Golden Gate, este método no se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular que se va a clonar. Fue encontrado por Daniel G. Gibson del Instituto J. Craig Venter. Esta técnica es un tipo de método de clonación independiente de secuencia y ligasa (SLIC).

Figura 02: ensamblaje de Gibson

Procedimiento de montaje de Gibson

Gibson Assembly requiere fragmentos de ADN de 20 a 40 pares de bases que se superponen con fragmentos de ADN adyacentes. Las superposiciones se agregan a través de PCR. Luego, estos fragmentos de ADN se agregan a la mezcla Gibson Maser que contiene tres enzimas. Este procedimiento se realiza en condiciones isotérmicas (50 °C durante 1 hora) utilizando tres enzimas diferentes: exonucleasa, ADN polimerasa y ADN ligasa. La exonucleasa mastica el ADN desde el extremo 5'. Por lo tanto, no inhibe la actividad de la polimerasa y permite que la reacción se lleve a cabo en un solo proceso. Las regiones monocatenarias resultantes en fragmentos de ADN adyacentes pueden reasociarse debido a la superposición de secuencias. La ADN polimerasa llena los huecos añadiendo nucleótidos. Finalmente, la ADN ligasa se une covalentemente al ADN de los segmentos adyacentes. Por lo general, Gibson Assembly usa vectores objetivo linealizados. Además, debido a la similitud de secuencia, este método puede combinar simultáneamente hasta 15 fragmentos de ADN.

Similitudes entre Golden Gate y Gibson Assembly

• Golden Gate y Gibson Assembly son dos métodos de clonación molecular.
• Ambos métodos pueden unir múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza.
• Estos métodos utilizan vectores objetivo.
• Ambos métodos utilizan termocicladores para ensamblar múltiples fragmentos de ADN.
• Se utilizan en mutagénesis dirigida al sitio.

Diferencia entre Golden Gate y Gibson Assembly

Golden Gate es un método de clonación molecular que se utiliza para ensamblar varios fragmentos de ADN en una sola pieza en función de la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia específica que se va a clonar, mientras que Gibson Assembly es un método de clonación molecular que se utiliza para ensamblar múltiples fragmentos de ADN en un pieza única sin depender de la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular para ser clonada. Esta es la principal diferencia entre Golden Gate y Gibson Assembly. Además, el método Golden Gate usa un vector objetivo circular mientras que el método Gibson Assembly usa un vector objetivo linealizado.

La siguiente infografía enumera la diferencia entre Golden Gate y Gibson Assembly.

Resumen: Golden Gate vs. Gibson Assembly

La clonación molecular es un método utilizado para ensamblar moléculas de ADN recombinante y dirigir su replicación dentro de los organismos huéspedes. Golden Gate y Gibson Assembly son dos métodos de clonación molecular que permiten ensamblar múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza. El método Golden Gate se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular que se clonará, mientras que Gibson Assembly no se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular que se clonará. Entonces, esta es la principal diferencia entre Golden Gate y Gibson Assembly.

Relación:

1. “Asamblea Golden Gate”. New England Biolabs: Reactivos para la industria de las ciencias de la vida.

Imagen de cortesía:

1. "Asamblea Golden Gate" por Lee Yun Jie - Trabajo propio (CC BY-SA 4.0) a través de Commons Wikimedia
2. "Descripción general del ensamblaje de Gibson" por Tobias Vornholt - Trabajo propio (CC BY-SA 4.0) a través de Commons Wikimedia