Diferencia entre cromatoenfoque y enfoque isoeléctrico

Que diferencia principal entre cromatoenfoque y enfoque isoeléctrico El enfoque cromatográfico es un tipo de método de cromatografía en columna que utiliza resinas de intercambio iónico, mientras que el enfoque isoeléctrico es un tipo de técnica de electroforesis que utiliza geles de gradiente de pH inmovilizados.

El cromatoenfoque y el enfoque isoeléctrico son dos técnicas que separan las proteínas según sus puntos isoeléctricos. Tanto el enfoque cromatográfico como el isoeléctrico tienen un alto poder de resolución. El enfoque cromático es un método de cromatografía en columna de alta resolución, mientras que el enfoque isoeléctrico es un método de separación electroforética. Además, el enfoque cromatográfico no utiliza un campo eléctrico, mientras que el enfoque isoeléctrico requiere un campo eléctrico.

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CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia clave
2. ¿Qué es el cromatoenfoque?
3. ¿Qué es el enfoque isoeléctrico?
4. Similitudes entre el cromatoenfoque y el enfoque isoeléctrico
5. Comparación lado a lado: cromatoenfoque frente a enfoque isoeléctrico en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es el cromatoenfoque?

Chromatofocusing es un tipo de cromatografía de alta elución que separa las proteínas en función de las diferencias en su punto isoeléctrico. Utiliza una columna de resina de intercambio iónico y un gradiente de pH desarrollado internamente. A diferencia del enfoque isoeléctrico, el enfoque cromatográfico no implica un campo eléctrico. Chromatofocusing es una poderosa técnica de purificación que puede resolver moléculas muy similares que difieren en tan solo 0,02 unidades de pH. Por lo tanto, el cromatoenfoque es más adecuado como paso de pulido final cuando se requiere alta resolución para separar componentes muy similares.

En el cromatoenfoque, la muestra se carga en la columna mezclándola con el tampón inicial. Las proteínas cuyo pH está por encima de su punto isoeléctrico tienen carga negativa y permanecen cerca de la parte superior de la columna, mientras que otras proteínas cuyo pH está por debajo de su punto isoeléctrico migran hacia abajo en la columna. La proteína con el punto isoeléctrico más alto eluye primero, mientras que la proteína con el punto isoeléctrico más bajo eluye en último lugar de la columna. Esta técnica está influenciada por varios factores, como la precipitación de proteínas y la linealidad del gradiente de pH.

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¿Qué es el enfoque isoeléctrico?

El enfoque isoeléctrico es una técnica que separa diferentes moléculas en función de su punto isoeléctrico. También se conoce como electroenfoque. Esta técnica se utiliza a menudo para la separación de proteínas en un gel. En el enfoque isoeléctrico, la muestra se coloca en geles de gradiente de pH inmovilizado (IPG). El gel IPG es una matriz de gel de acrilamida copolimerizada en gradiente de pH. Las proteínas migran al cátodo hasta encontrar el rango de pH de sus puntos isoeléctricos. Cuando una proteína alcanza el pH en el que no hay carga neta, la migración se detiene y da como resultado una banda estacionaria. Asimismo, cada proteína da una banda en un punto del gradiente de pH que corresponde a su punto isoeléctrico.

Figura 01: Enfoque isoeléctrico

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El enfoque isoeléctrico es el primer paso en la electroforesis en gel bidimensional. En esta técnica, las proteínas se separan primero por sus puntos isoeléctricos mediante enfoque isoeléctrico y luego por su peso molecular mediante SDS-PAGE.

¿Cuáles son las similitudes entre el cromatoenfoque y el enfoque isoeléctrico?

• El cromatoenfoque y el enfoque isoeléctrico son dos métodos de alta resolución.
• Ambos se basan en el punto isoeléctrico de las proteínas.
• Estas técnicas utilizan un gradiente de pH.
• Ambos métodos son informativos para la caracterización de variantes de hemoglobina humana.
• Puede resolver moléculas en las que los valores de pI difieren en tan solo 0,02 unidades de pH.

¿Cuál es la diferencia entre el enfoque cromato y el enfoque isoeléctrico?

Chromatofocusing es una técnica de cromatografía en columna de alta resolución que separa las proteínas según su punto isoeléctrico. Por el contrario, el enfoque isoeléctrico es una técnica electroforética que separa las proteínas según su punto isoeléctrico aplicando un campo eléctrico a lo largo de un gradiente de pH formado en un capilar. Entonces, esta es la diferencia clave entre el enfoque cromático y el enfoque isoeléctrico.

Otra diferencia entre el enfoque cromatográfico y el enfoque isoeléctrico es que el enfoque cromatográfico no implica un campo eléctrico, mientras que el enfoque isoeléctrico requiere un campo eléctrico.

Resumen: cromatoenfoque frente a enfoque isoeléctrico

El cromatoenfoque y el enfoque isoeléctrico son dos técnicas similares que tienen un alto poder de resolución de moléculas, especialmente moléculas muy similares. El cromatoenfoque es una técnica de cromatografía en columna de alta resolución, mientras que el enfoque isoeléctrico es un método de electroforesis. A diferencia del enfoque isoeléctrico, el enfoque cromatográfico no implica un campo eléctrico. Por lo tanto, esto resume la diferencia entre el enfoque cromato y el enfoque isoeléctrico.

Relación:

1. "Cromatoenfoque: principios y métodos". Sigma, disponible aquí.
2. “Enfoque isoeléctrico”. En.Wikipedia.Org, 2020, Disponible aquí.

Imagen de cortesía:

1. "Contribución a Isoelectric Focusing2" por Mrbean427 - Trabajo propio (CC BY-SA 3.0) a través de Commons Wikimedia