Aprenda el proceso de calibración del espectrofotómetro UV/VIS que incluye el control de las longitudes de onda con óxido de holmio, la potencia de resolución con tolueno en hexano, el control de la absorbancia mediante una solución de dicromato de potasio y el límite de la luz dispersa con una solución de cloruro de potasio.
La espectrofotometría UV-Vis (Ultravioleta-visible) es una técnica para medir la absorción de luz en el rango de longitud de onda ultravioleta y visible del espectro electromagnético. La luz incidente puede absorberse, transmitirse o reflejarse a medida que incide sobre las cosas. La excitación atómica se debe a la absorción de la luz UV-Vis, que hace referencia a la transición de las moléculas de un estado básico de baja energía a un estado excitado.
Tabla de contenidos:
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Propósito de la calibración del espectrofotómetro UV/VIS:
El objetivo de la calibración es garantizar el rendimiento, la precisión del resultado y establecer la fiabilidad del espectrómetro. Se utiliza en el análisis cualitativo y cuantitativo de analitos basados en la ley de lamberts de cerveza, por eso a menudo necesitamos comprobar el rendimiento de los instrumentos ya sea internamente o por un ingeniero de servicio.
La calibración UV es uno de los requisitos básicos que garantizan el cumplimiento del estándar según la Farmacopea India (IP) y la Farmacopea Británica (BP). El parámetro de prueba de calificación del instrumento consiste en el control de la longitud de onda, el control de la absorbancia, el límite de la luz dispersa y la potencia de resolución.
Control de la longitud de onda: Es un proceso por el que se determina la precisión escaneando una solución conocida para la máxima lambda.
Control de la absorbancia: Es un proceso por el que se determina la precisión escaneando manualmente una solución cromofórica y registrando la absorbancia.
Límite de la luz dispersa: La luz dispersa es una radiación electromagnética que no es necesaria para el análisis del espectrofotómetro y sólo interfiere con el proceso.
Poder de resolución: Es la capacidad de resolver características espectrales y bandas en sus componentes separados.
Preparación de los disolventes necesarios para la calibración:
Preparación de la solución de ácido perclórico (1,4 M):
Tomar 11,50 ml de ácido perclórico de grado AR (70%) con una pipeta, diluir hasta 100 ml de agua destilada en un matraz aforado limpio y seco y mezclarlo correctamente.
Preparación de la solución de óxido de holmio (4% p/v):
Tome 01,00 g de óxido de holmio de grado AR y disolverlo en una solución de ácido perclórico 1,4 M con la ayuda de calentamiento. Una vez disuelto completamente, levante el volumen a 25 ml.
Preparación de la solución de ácido sulfúrico (0,005 M):
Tomar 0,6 ml de ácido sulfúrico (H2SO4) con una pipeta, diluir 2000 ml de agua destilada en un matraz aforado y mezclarlo correctamente.
Preparación de la solución de dicromato de potasio:
Tome de 57 a 63 mg de dicromato de potasio de grado AR previamente secado (K2Cr2O7) y disuelve en 1000 ml de ácido sulfúrico 0,005 M.
Preparación de cloruro de potasio (1,2 % p/v):
Tomar 01,20 g de cloruro de potasio previamente secado y disolver en 50 ml de agua destilada. Una vez disuelto completamente, aporte el volumen a 100 ml con agua destilada.
Preparación de la solución de tolueno en hexano (0,02%):
Tomar 01,00 ml de tolueno de grado HPLC con una pipeta, diluir en 50 ml de hexano de grado HPLC en un matraz aforado y mezclarlo correctamente. Tome 0,5 ml de esta solución y vuelva a diluir a 50 ml con hexano.
Procedimiento de calibración:
Los siguientes son parámetros de calibración del espectrofotómetro UV visible y sus límites estrictos se adoptan de la farmacopea IP, USP y BP para los criterios de aceptación. Para el funcionamiento del instrumento, siga el procedimiento operativo estándar (SOP) y las directrices operativas del laboratorio.
Calificación de cubetas:
Tome la transmitancia de la cubeta limpia y en blanco a 200 nm. Los criterios de aceptación a 200 nm son T% > 80% y deberían coincidir en un 1,5%.
Llene la cubeta con agua Millipore, tome la absorbancia a 240 nm, anote la lectura. Los criterios de aceptación de absorbancia de la cubeta individual no superarán los 0,093.
Control de la longitud de onda:
Tome el espectro UV del filtro de óxido de holmio o prepare una solución de óxido de holmio al 4% p/v en el rango de 200 nm a 600 nm utilizando ácido perclórico 1,4 M como blanco.
Criterios de aceptación:
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Longitud de onda
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Tolerancia
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241,14 nm |
240.15 a 242.15 |
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287,15 nm |
286,15 a 288,15 |
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361,50 nm |
360,50 a 362,50 |
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536,30 nm |
533,30 a 539,30 |
Control de la absorbancia:
Tome la absorbancia del dicromato de potasio al 1,2% a la longitud de onda indicada a continuación y calcule el valor de A (1% 1cm) para cada longitud de onda. A (1% 1cm) = absorbancia x 1000/peso de K2Cr2O7.
Criterios de aceptación:
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Longitudes de onda
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Tolerancia
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235 nm |
122,9 a 126,2 |
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257 nm |
142,8 a 146,2 |
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313 nm |
47,0 a 50,3 |
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350 nm
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105,6 a 109,0 |
Límite de la luz dispersa:
Utilizando agua como blanco, mide la absorbancia de la solución preparada de cloruro de potasio al 1,2% utilizando una longitud de recorrido de 1 cm a 200 nm. Los criterios de aceptación de la absorbancia a 200 nm deben ser superiores a 2,0.
Poder de resolución:
Tome el espectro UV de la solución de tolueno preparada al 0,02% v/v en el rango de 250 nm a 300 nm utilizando hexano como blanco. Anote la absorbancia a 269 nm para los máximos y 266 nm para los mínimos. Los criterios de aceptación de la resolución calculada no serán inferiores a 1,2.
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