La fluorometría es un tipo de espectroscopia y también se llama espectroscopia de fluorescencia. Se utiliza para identificar y determinar las concentraciones de analito en una muestra. Los mecanismos implican la excitación de un haz de luz ultravioleta en las moléculas de un analito específico y les permiten emitir luz visible. A una longitud de onda, es la absorción molecular de energía luminosa y su reemisión casi instantánea a una longitud de onda más larga y distinta. Varias moléculas son inherentemente fluorescentes, y otras deben modificarse por fluorescencia.
|
Tabla de contenidos
|
Principio de fluorometría:
La fosforescencia y la fluorescencia son procesos de emisión de fotones, que surgen de estados excitados electrónicamente durante la relajación molecular. Estos mecanismos fotónicos provocan las moléculas fluorescentes poliatómicas (fluoróforos) entre estados vibracionales y electrónicos. Los fluoróforos desempeñan un papel esencial en la espectroscopia de fluorescencia. Los fluoróforos son los componentes que producen fluorescencia en las moléculas. Las muestras que se han excitado electrónicamente después de la absorción de radiación UV (200 nm a 400 nm), visible (400 nm a 800 nm) o NIR (700 nm a 1100 nm). El método de excitación es muy rápido desde el estado fundamental hasta el estado excitado del orden de 10 a 15 segundos. La molécula se relaja rápidamente después de la excitación, hasta el punto de vibración más bajo del estado electrónico excitado. El proceso rápido de relajación vibracional tiene lugar en la escala de tiempo de femtosegundos a picosegundos. Los espectros de emisión y excitación de la fluorescencia, respectivamente, reflejan las estructuras de nivel vibracional en el suelo y los estados electrónicos excitados.
Los distintos estados electrónicos en fluorimetría son los siguientes.
Estado excitado de la camiseta: Es un estado en el que los electrones del espín opuesto están desparejados.
Estado triplete: Es un estado en el que hay electrones no pareados de spin idéntico
Estado doblete: Es un estado que contiene electrones no emparejados.
Estado fundamental del single: Es un estado en el que todos los electrones están emparejados dentro de una molécula.
Aplicaciones de la espectroscopia de fluorescencia:
- La aplicación de la fluorometría es importante como potente y valiosa herramienta para estudiar el comportamiento físico y químico de las macromoléculas.
- Espectroscopía de fluorescencia utilizada en análisis ambiental.
- La espectroscopia de fluorescencia se utiliza cuando la muestra teme y es compleja de procesar.
- Espectroscopía de fluorescencia utilizada en el análisis de alimentos.
- Se utiliza para determinar varios tipos de analitos en suero.
- Cada forma de actividad de fluorescencia es para ayudarle a aplicar sondas fluorescentes en sistemas de polímeros.
- Espectroscopía de fluorescencia utilizada en el procesamiento de productos lácteos.
Las ventajas de la espectroscopia de fluorescencia son las siguientes.
- Debido a las propiedades ópticas únicas de las moléculas, posee una alta precisión.
- La espectroscopia de fluorescencia puede utilizarse para la cuantificación de especies fluorescentes.
- Esto puede calcular el tiempo de decadencia, la intensidad de fluorescencia y la concentración del componente.
- Este método es menos costoso en comparación con otros métodos.
- Tiene la capacidad de diagnóstico rápido y rápido.
Las desventajas de la espectroscopia de fluorescencia son las siguientes.
- La principal desventaja de la espectroscopia de fluorescencia es que sólo puede analizarse moléculas fluorescentes.
- Tiene limitaciones asociadas a la pérdida de la fotoestabilidad y la capacidad de reconocimiento
- Los fluoróforos tienen una corta vida útil.
- También es susceptible a la autofluorescencia de la solución.
- Puede ser susceptible a interferencias debido a los cambios en el pH de la muestra y los niveles de oxígeno.
Diferencia entre espectrofluorómetro y espectrofotómetro:
La principal diferencia entre el espectrofluorómetro y el espectrofotómetro es que el espectrofluorómetro se utiliza para determinar la fluorescencia de los analitos, mientras que el espectrofotómetro se utiliza para determinar la intensidad de la radiación electromagnética.
Las preguntas más frecuentes sobre fluorometría son las siguientes.
¿Qué es la espectroscopia de fluorescencia?
La espectroscopia de fluorescencia es una herramienta para determinar la fluorescencia de sus componentes, a menudo como medio para medir la naturaleza de la sustancia que emite fluorescencia.
¿Cuál es el principio básico de la espectroscopia de fluorescencia?
Una molécula es absorbida y excitada por radiación electromagnética incidental. En su estado excitado, es inestable y, al emitir radiación, vuelve al estado fundamental.
¿Cuáles son los tipos de fluorómetro?
El fluorómetro de filtro y el espectrofluorómetro son los dos tipos básicos de fluorómetro.
¿Cuál es la gran ventaja espectroscopia de fluorescencia?
La alta sensibilidad y su límite de detección muy bajo son las principales ventajas de la espectroscopia de fluorescencia.
Deja una respuesta