Efecto del pH en la cromatografía de fase inversa

El pH de la fase móvil en HPLC de fase inversa es un factor importante, puede afectar la forma del pico así como el tiempo de retención de la molécula porque afecta el estado de ionización de la molécula y, por lo tanto, la química de las moléculas. interacciones en la columna de HPLC. Por lo tanto, es importante mantener el pH correcto para el compuesto que puede verse afectado por el cambio de pH de la fase móvil y el tampón. La trietilamina y el ácido trifluoroacético son modificadores comunes de la fase móvil, pero no mantienen el pH, por lo que necesita una solución tampón. Resisten un cambio de pH cuando se añaden pequeñas cantidades de ácido o álcali. Una solución amortiguadora contiene una mezcla de una base débil y su ácido conjugado (o un ácido débil y su base conjugada).

El efecto del pH de la fase móvil en la cromatografía líquida de alta resolución puede influir en la selectividad, el tiempo de retención y la robustez del método.

Selectividad:

Los cambios mínimos en el pH de la fase móvil también pueden tener un efecto dramático en la selectividad de los analitos débilmente ionizables.

Tiempo de retención del analito:

Cuando cambia el pH de la fase móvil, se produce un cambio drástico en el tiempo de retención de los analitos ácidos y básicos. Cuando se cambia la ionización de estas moléculas, a menudo es el resultado de diferentes interacciones entre la columna y las moléculas.

Robustez del método:

Para obtener la mejor aspereza, elija un pH para el tampón o la fase móvil donde la selectividad y la RT no cambien si el pH cambia ligeramente.