HPLC de cromatografía de par de iones de fase inversa

La cromatografía de pares de iones ayuda a separar los analitos cargados mediante la popular cromatografía de fase inversa. Los reactivos de pares de iones mejoran la forma del pico y el tiempo de retención cuando cambiar las proporciones de la fase móvil o cambiar la fase estacionaria no ayuda mucho.

La técnica fue desarrollada en 1973 por el Dr. Gordon Shill. El reactivo de pares iónicos tiene un grupo funcional terminal iónico al final de una cadena no polar. El reactivo se agrega a la fase móvil y se deja suficiente tiempo para que se equilibre con la columna. El extremo no polar de la cadena está fuertemente unido a la fase estacionaria no polar, mientras que el extremo cargado sobresale hacia la fase móvil. Las partículas iónicas de carga opuesta en la fase móvil son inmovilizadas por la carga del reactivo, lo que da como resultado un apareamiento de iones neutros entre la molécula de muestra y el reactivo. Esto ayuda en la retención de carga selectiva a los analitos en HPLC de fase inversa.

La cromatografía de intercambio iónico había existido durante varios años, pero la introducción de la cromatografía de par iónico ofreció varias ventajas:

• Fácil preparación de tampones
• Amplia variedad de longitudes de cadena de carbono para mejorar la retención y la separación
• Tiempo de separación significativamente más corto
• Separación simultánea de moléculas ionizadas y no ionizadas
• Alta reproducibilidad de los resultados
• Formas de pico mejoradas

El análisis de muestras ácidas se realiza mediante la adición de sales de amonio cuaternario como el cloruro de tetrabutilamonio a la fase móvil.

\(RCOO ^- +R'_4N^+ \flecha derecha RCOONR'_4\)

De manera similar, se puede usar un reactivo cargado negativamente, como un ácido sulfónico de alquilo, para retener selectivamente bases iónicas cargadas positivamente.

\(RNH_3^+ + R'SO_3^- \right RNH_3O_3S-R'\)

Precauciones al usar reactivos de par de iones:

• Los reactivos de pares de iones seleccionados no deben tener absorbancia en el rango de longitud de onda de fluorescencia o UV seleccionado para el análisis
• Tanto la composición como la temperatura de la fase móvil deben controlarse cuidadosamente para excluir la elución en gradiente cuando se utilizan reactivos de par de iones.
• Permita suficiente tiempo para que la fase móvil se equilibre con la columna de modo que se minimicen los cambios en la fase móvil o la temperatura.
• La columna utilizada con agentes de par de iones debe usarse para tales análisis, ya que es difícil eliminar por completo los reactivos de par de iones incluso después de un lavado extenso.

Si tiene experiencia en el uso de separaciones de pares de iones, deje sus comentarios y comparta su experiencia con otros.