Cromatografía en papel: principio, procedimiento, aplicaciones

¿Qué es la cromatografía en papel?

La definición de cromatografía en papel explica que se trata de una técnica analítica barata y potente, que requiere un trozo de papel o tiras para actuar como adsorbente en la fase estacionaria a través de la cual se permite una solución determinada.

Para la separación de sustancias químicas disueltas y (especialmente) muestras de lípidos, la cromatografía en papel ha demostrado ser muy fiable. Esta herramienta analítica utiliza muy pocas cantidades de material.

Principio de la cromatografía en papel

La cromatografía en papel es una forma de cromatografía líquida en la que el principio básico puede ser la cromatografía de partición o la cromatografía de adsorción.

En la cromatografía en papel, la separación del componente se distribuye entre las fases líquidas. Aquí, una fase de líquido es agua que se retiene entre los poros del papel de filtro y el otro líquido es la fase móvil que viaja con el papel de filtro. La separación de la mezcla es el resultado que se obtiene de las diferencias de afinidad por el agua y las fases móviles al transitar por capilaridad entre los poros del papel filtro.

Aunque en la mayoría de las aplicaciones de la cromatografía en papel el principio se basa en la cromatografía de partición, a veces la cromatografía de adsorción puede tener lugar donde la fase estacionaria es la superficie sólida del papel y la fase móvil es la fase líquida.

Procedimiento de cromatografía en papel

1. Selección del tipo ideal de desarrollo: El tipo de revelado se selecciona en base a factores como la complejidad del solvente, mezcla, papel, etc. Por lo general, se utiliza la cromatografía en papel radial o ascendente debido a la facilidad que brindan en el manejo y la ejecución, lo que en última instancia conduce a una adquisición de cromatogramas más rápida en un período de tiempo más corto.

2. Selección de papel de filtro: Según el tamaño de los poros y la calidad de la muestra.
3. Preparación de la muestra: Esto implica disolver la muestra en un solvente ideal usado en el desarrollo de la fase móvil.
4. Cargando o manchando la muestra en el papel: Usando un tubo capilar, micropipeta, la muestra se coloca sobre el papel en una posición precisa. Esto hace que la interpretación del cromatograma sea más rápida y sencilla.
5. Desarrollo del cromatograma: Esto está respaldado por la inmersión del papel en la fase móvil. La fase móvil atraviesa la muestra sobre el papel debido a la acción capilar del papel.
6. Secado de papel y detección de la conexión: Usando un secador de aire, el papel se seca una vez que se ha desarrollado el cromatograma. La solución de detección se rocía completamente sobre el papel revelado para el cromatograma y se seca para identificar los puntos del cromatograma de la muestra.

Tipos de cromatografía en papel

Cromatografía en papel ascendente
Como su nombre lo indica, el solvente en desarrollo parece moverse en dirección ascendente. Aquí, se vierte una cantidad suficiente de fase móvil en la cámara de desarrollo. La muestra y la referencia se ubican en la línea trazada a unas pocas pulgadas del borde inferior del papel y se cuelgan de un gancho o clip en la parte superior.

Cromatografía en papel descendente
Aquí, el frente del solvente viaja a lo largo del papel que cuelga de la parte superior en la cámara de revelado. La fase móvil se mantiene en un canal en la cámara superior. El papel con manchas en la línea dibujada a unos centímetros de la parte superior se sujeta en la parte superior. Antes de la elución, se tapa el frasco y se equilibra con el vapor de la fase móvil.

Cromatografía ascendente – descendente
Es una forma mixta de cromatografía donde el solvente sube primero sobre el papel doblado sobre una barra y baja después de cruzar la barra.

Cromatografía en papel horizontal o circular
Esto permite la separación de los componentes de la muestra en forma de zonas circulares concéntricas por el movimiento radial de la fase líquida.

Cromatografía bidimensional
Esto ayuda a disolver sustancias con valores Rf similares.

Donde, factor de retardo (Rf) = distancia recorrida por el soluto/distancia recorrida por el frente del solvente

Aplicaciones de cromatografía en papel

En el análisis de diferentes clases de compuestos a saber:

• Aminoácidos y ácidos orgánicos
• alcaloides
• polisacáridos
• Proteínas y Péptidos
• Pigmentos Naturales y Artificiales
• cationes inorgánicos
• Extractos de plantas

Aplicaciones de la cromatografía en papel en varias áreas clave

El uso de la cromatografía en papel no se limita a un área en particular. Algunas de las áreas necesarias son:

• Monitoreo de respuesta – El progreso de la reacción se puede estimar desarrollando el cromatograma en diferentes intervalos de tiempo al detectar los reactivos.
• Aislamiento y Purificación – Esta técnica es útil en la purificación y aislamiento de componentes de mezclas. Aquí, los componentes separados se cortan en el papel, se disuelven en disolventes adecuados y su absorción se caracteriza a longitudes de onda específicas utilizando métodos espectroscópicos.
• alimentos - Análisis de colorantes alimentarios en bebidas y bebidas sintéticas, helados, dulces, etc. Solo se permite el uso de colorantes comestibles, por lo que su identificación y cuantificación son de suma importancia.
• forense - Proporciona una base para la identificación y comparación con estándares de referencia para fármacos y sus metabolitos. La cromatografía en papel juega un papel vital en el análisis viable de muestras disponibles en cantidades de miligramos o microlitros.
• Medicamentos - Proporciona información relacionada con el desarrollo de nuevas moléculas de fármacos, la finalización de las reacciones y el progreso de los procesos de fabricación. Este proceso es rentable y, por lo tanto, se utiliza como un método alternativo para controlar los ingredientes activos en las formas farmacéuticas. La cromatografía en papel también es aplicable a la identificación del color de formulaciones farmacéuticas.

La técnica de la cromatografía en papel se ha utilizado ampliamente en los últimos años y todavía se mantiene firme en relación con la separación de diferentes clases de compuestos.