En RP-HPLC la fase estacionaria es polar y la fase móvil no polar, mientras que en NP-HPLC la fase estacionaria es no polar y la fase móvil es polar. Ésta es la diferencia clave entre HPLC de fase inversa y fase normal.
Cromatografía en fase normal:
- En un entorno muy no polar, los analitos hidrófilos interactuarán entre sí. En la fase móvil, la molécula hidrófila se moverá hacia la adsorción en el exterior y en el interior de una partícula si la superficie también es hidrófila. El aumento de la polaridad de la fase móvil reducirá la adsorción y, por último, las moléculas de la muestra eluirán fuera de la columna. Este hecho se llama cromatografía de fase normal. Ésta es una técnica muy potente y se utiliza principalmente como técnica analítica en química analítica.
- Los sistemas HPLC de fase normal son paralelos a la cromatografía de columna flash
- Una fase estacionaria de sílice se eluye con un disolvente no polar o una mezcla de disolventes bastante no polar. En la cromatografía RP, sólo se utilizan disolventes orgánicos.
- En la fase normal, los analitos no polares eluyen rápidamente en comparación con los analitos polares.
Cromatografía de fase inversa:
- El trabajo de esta técnica es lo contrario a la fase normal. La reducción de la polaridad de la fase móvil añadiendo más disolventes orgánicos disminuye la interacción hidrofóbica entre el soporte sólido y el soluto, dando lugar a la desorción. Las moléculas más hidrofóbicas tienen más tiempo sobre el soporte sólido y las concentraciones de disolventes orgánicos más necesarias para favorecer la desorción.
- La fase inversa es el trabajo opuesto a la cromatografía en fase normal.
- Con una mezcla de disolventes polares, se eluye una fase estacionaria no polar.
- En la fase inversa, las moléculas polares eluyen rápidamente en comparación con los analitos no polares.
