¿Por qué se utiliza la elución de gradiente en HPLC?

Debido al amplio rango K de moléculas que no pueden separarse fácilmente mediante métodos isocráticos, se sugiere la elución del gradiente en este caso. La razón más importante para la elución del gradiente es mover rápidamente a los analitos fuertemente retenidos de la mezcla, pero al menos resolver bien el componente de retención. Varios problemas relacionados con la elución isocrática en la cromatografía de fase inversa pueden superarse con el uso de la elución en gradiente. En esta forma de análisis, la composición de la fase móvil se modifica a lo largo del análisis aumentando el número de modificadores orgánicos.

La composición final de la fase móvil se selecciona para asegurar que todas las moléculas se separan de la columna HPLC en el tiempo deseado. Es factible aumentar la concentración de modificadores orgánicos para eliminar los compuestos potencialmente contaminados y fuertemente retenidos de la columna. El método del gradiente es el mejor para los análisis realizados mediante cromatografía de fase inversa, cromatografía de fase normal y cromatografía de intercambio iónico. Se necesitan bombas HPLC especiales para realizar análisis de gradiente, que permiten la mezcla online de la composición de la fase móvil.

Cuando se utiliza un tampón en HPLC