¿Qué es HPLC/cromatografía líquida de alta resolución?

¿Qué es HPLC?

La pregunta básica que necesita una respuesta simple es: “¿Qué es HPLC??” En términos simples, HPLC es una técnica analítica utilizada para la separación de componentes de una mezcla orgánica de compuestos cuando dichos compuestos no son volátiles, son térmicamente inestables y tienen pesos moleculares relativamente altos.

Una corriente de líquido portador llamada fase móvil sirve para transportar la muestra inyectada a través de la columna de separación y al detector. En la columna de separación, los componentes individuales se separan sobre la base de interacciones fisicoquímicas y el orden de elución se basa en dichas interacciones. Los componentes separados son detectados por el detector en función de la absorción de luz o cambios en el índice de refracción, cambios electroquímicos/de conductividad o simplemente la distribución de tamaño de las moléculas eluidas.

La respuesta del detector se presenta en forma de picos con un área directamente proporcional a la cantidad presente. La salida es monitoreada y evaluada por el software de control que no solo realiza los cálculos necesarios sobre la respuesta, sino que también admite parámetros operativos como el volumen de inyección, la secuencia de inyección, la longitud de onda de detección, los ciclos de lavado, etc.

Hoy en día, las funciones avanzadas del software disponible han hecho que la operación sea muy fácil de usar. La mayor parte del tiempo que un usuario pasa preparando la fase móvil, preparando tampones y estándares e ingresando registros.

Las ciencias de la separación han contribuido en gran medida al crecimiento y la comprensión de la química analítica y a un mejor control de la calidad de los productos de consumo, como productos farmacéuticos, alimentos y bebidas, polímeros, control medioambiental, etc. Las técnicas cromatográficas y la HPLC en particular merecen gran reconocimiento.

Introducción a la cromatografía líquida de alta resolución y sus componentes

Potente cromatografía líquida (HPLC) es una técnica popular y versátil que proporciona soluciones asequibles para la separación, identificación y cuantificación de constituyentes de muestras orgánicas complejas. A primera vista, puede que le sorprenda el montaje de módulos complejos y muchos tubos. Sin embargo, después de comprender la función de cada parte, el misterio se revelará y el sistema de HPLC demostrará ser un dispositivo fácil de usar que, si se mantiene adecuadamente, garantizará la mayor precisión y confiabilidad de los resultados, análisis tras análisis.

Esta presentación de PowerPoint sobre "Introducción a la cromatografía líquida de alto rendimiento" es una introducción breve y concisa a los componentes de la HPLC. Es importante comprender las partes individuales y cómo cada una contribuye a la confiabilidad general del análisis. Su mayor nivel de comodidad le hará darse cuenta de que HPLC es un sistema fácil de usar y promete aplicaciones ilimitadas.

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Las diferentes combinaciones de estas partes son:

· Zapatillas

· detectores

· Los inyectores proporcionan un número infinito de configuraciones según la aplicación

Debe tener un buen conocimiento de los componentes de su sistema HPLC y el Principios de HPLC para generar datos con la máxima fiabilidad. Una comprensión conceptual de la función de cada parte contribuirá a su nivel de comodidad con su sistema de HPLC y garantizará un uso a largo plazo con una gran confianza en los datos de salida.

Fase líquida

La fase líquida se bombea a una velocidad constante a la columna llena con la fase estacionaria. Antes de ingresar a la columna, el analito se inyecta en la corriente portadora.

Al llegar a la columna, los componentes de la muestra se retienen selectivamente en función de las interacciones fisicoquímicas entre las moléculas del analito y la fase estacionaria.

Fase móvil

La fase móvil sirve para transportar la muestra al sistema. Los criterios esenciales de la fase móvil son la inercia de los componentes de la muestra. A menudo se utilizan disolventes puros o combinaciones de tampones. La fase móvil debe estar libre de partículas contaminantes y desgasificada antes de su uso.

Yacimientos de fase móvil

Son recipientes inertes para almacenamiento y transporte en fase móvil. En general, se utilizan botellas de vidrio transparente para facilitar la inspección visual del nivel de la fase móvil en el recipiente. Los filtros de hollín de acero inoxidable están instalados en el interior para eliminar cualquier partícula de hollín en la fase móvil.

Zapatillas

Las variaciones en las tasas de flujo de la fase móvil afectan el tiempo de elución de los componentes de la muestra y provocan errores. Las bombas proporcionan un flujo constante de la fase móvil a la columna bajo presión constante.

inyectores

Los inyectores se utilizan para proporcionar una inyección de volumen constante de la muestra en la corriente de fase móvil. La inercia y la reproducibilidad de la inyección son necesarias para mantener un alto grado de precisión.

Columna

Una columna es un tubo de acero inoxidable lleno de una fase estacionaria. Es una pieza esencial y debe mantenerse adecuadamente de acuerdo con las instrucciones del proveedor para obtener la reproducibilidad y la eficiencia de separación ciclo tras ciclo.

Horno de columna

La variación de la temperatura durante la ejecución analítica puede provocar cambios en el tiempo de retención de los componentes de elución separados. Un horno de columna mantiene una temperatura de columna constante por medio de la circulación de aire. Esto asegura un caudal constante de la fase móvil a través de la columna.

Detector

Un detector proporciona una respuesta específica para los componentes separados por la columna y también proporciona la sensibilidad necesaria. Debe ser independiente de cualquier cambio en la composición de la fase móvil. La mayoría de las aplicaciones requieren detección UV-VIS, aunque hoy en día también son populares los detectores basados ​​en otras técnicas de detección.

Adquisición y control de datos

Los sistemas de HPLC modernos están basados ​​en computadora y el software controla los parámetros operativos, como la composición de la fase móvil, la temperatura, el caudal, el volumen y la secuencia de inyección, así como la adquisición y el manejo de la salida.

Versiones especializadas

Los sistemas de HPLC especializados también pueden tener válvulas de selección de solventes, desgasificadores de vacío, muestreadores automáticos, interruptores de columna, derivatización antes o después de la columna y colectores de fracciones. Todos estos están cubiertos en detalle en nuestro Programa de certificado en línea de HPLC - Curso de certificado de HPLC.

Infografía: ¿Qué implica realmente ejecutar una HPLC?

Cualquiera que trabaje en un laboratorio probablemente use un HPLC en un momento u otro. Desde el momento en que complete su graduación, posgrado o doctorado, o comience a trabajar en una industria, es posible que deba confiar en HPLC para responder algunas preguntas esenciales. La mayoría de nosotros creemos que basta con poder ejecutar el software e inyectar muestras.

Lejos de este mito, la cirugía HPLC requiere comprensión y conocimiento de mucho más que el software y el hardware. Estos son, de hecho, una parte muy pequeña del panorama general. En un día normal en un laboratorio de HPLC, dedicaría solo una fracción de su tiempo a ejecutar el sistema. La mayor parte del tiempo se dedicará a preparar las muestras, la fase móvil, los tampones, completar los registros y varios formularios y formatos.

La infografía está diseñada para guiarlo a través de una serie de 18 pasos lógicos que describen el camino para lograr sus objetivos de aprendizaje. El enfoque sistemático ofrece un paquete completo para garantizar el valor de su inversión y tiempo. ¡Lea nuestra guía simplificada de 18 pasos para la cromatografía líquida de alta resolución y comience!

HPLC: la técnica analítica de la nueva era

La química analítica se está convirtiendo en una opción popular como opción de carrera para los estudiantes que siguen la disciplina de la química. La razón obvia es que aplica conocimientos de química para comprender las propiedades químicas de los materiales. Hace una valiosa contribución para determinar la calidad de los recursos naturales y productos industriales sintéticos para nuestro consumo. La calidad de dichas fuentes y su consistencia dependen en gran medida de las determinaciones precisas realizadas por los químicos analíticos en sus laboratorios.

La cromatografía en general y la HPLC en particular han hecho contribuciones notables a la investigación y el desarrollo de productos. HPLC merece una mención especial porque encuentra numerosas aplicaciones en investigación farmacéutica, alimentaria, bioquímica, polímeros sintéticos, estudios de biomoléculas y monitorización ambiental. El alcance de HPLC se está expandiendo a un ritmo asombroso y casi a diario se informan muchas aplicaciones nuevas en revistas de investigación de renombre.

Este artículo destaca algunos de los desarrollos recientes que han contribuido a la adopción generalizada de HPLC como una técnica popular en los laboratorios modernos.

Escala de operación

HPLC hace posible analizar una muestra en una amplia gama de concentraciones y pesos moleculares. El análisis generalmente se realiza para cantidades de muestra que van desde picogramos hasta cantidades a nivel de gramo utilizando diferentes tamaños de columna y modos operativos. Los avances en polímeros sintéticos y biomoléculas grandes son el resultado de la capacidad de HPLC para procesar muestras de bajo peso molecular en varios millones de muestras de peso molecular.

Avances en tecnologías de fase estacionaria

Las columnas a base de sílice siguen siendo la columna vertebral de las fases estacionarias hasta el día de hoy. Sin embargo, columnas con fases monolíticas, fases base de circón y los basados ​​en tecnologías basadas en core shell han contribuido a aumentar la velocidad de análisis, el rango de temperatura y presión, y los estudios en un rango más amplio de pH de medios.

Elección de detectores

HPLC ofrece varias opciones de detección basadas en las características de los compuestos eluidos. Las opciones comúnmente disponibles son detectores UV, detectores RI, detectores de matriz de fotodiodos, detectores de fluorescencia, detectores de conductividad, detectores de dispersión de luz y detectores de selectividad de masa. LC-MS-MS es hoy ampliamente reconocida como una técnica altamente sensible que proporciona soluciones analíticas para el análisis de mezclas complejas y detecciones de límite bajo en estudios bioanalíticos y de residuos de pesticidas en productos agrícolas.

Elección de fases móviles

La cromatografía de fase inversa es el modo de operación más popular que utiliza solventes polares como fases móviles. Sin embargo, el uso de combinaciones de disolventes de diferentes polaridades, tampones y métodos isocráticos/de gradiente puede ser útil para resolver mezclas complejas de moléculas con picos muy próximos entre sí.

Las posibilidades de análisis que ofrece la técnica HPLC han contribuido a su creciente popularidad. Los laboratorios modernos tienen varios sistemas de HPLC que funcionan las 24 horas. Aprendizaje estructurado de la técnica. puede agregar valor al crecimiento de su carrera como químico analítico.