En el proceso, los analitos a separar se colocan sobre una columna sólida llena de absorbente. A continuación, la fase móvil se carga en la columna en la parte superior y se deja que la columna fluya lenta y continuamente. Los componentes con menor adsorción y afinidad hacia la fase estacionaria viajan rápidamente que los que tienen mayor adsorción y afinidad por la fase estacionaria. Los componentes de movimiento rápido se eluyen primero, seguidos de los componentes de movimiento lento.
Para separar los ingredientes activos mediante diversos métodos se utilizan distintos tipos de cromatografía en columna, tales como cromatografía en columna de adsorción, cromatografía en columna de partición, cromatografía en columna de hielo y cromatografía en columna de intercambio iónico.
Aplicaciones de la cromatografía en columna:
- La cromatografía en columna puede utilizarse para aislar muchas clases de fármacos y componentes como glicósidos, extractos de plantas, alcaloides, aminoácidos, formulaciones y fármacos.
- Se utiliza para la separación de mezclas de compuestos.
- Se utiliza para eliminar impurezas o el proceso de purificación.
- En cromatografía en columna Las impurezas de un compuesto se pueden separar utilizando la fase móvil adecuada y una fase estacionaria.
- Se aplica a la separación de componentes activos.
- A partir de los extractos brutos, la formulación, los componentes activos, los componentes necesarios del extracto vegetal pueden aislarse mediante este tipo de cromatografía.
- La cromatografía en columna se utiliza para la estimación del fármaco en su formulación.
- A partir de los fluidos biológicos, los metabolitos pueden separarse mediante cromatografía en columna.
- Mediante este método, es posible estimar el fármaco en el extracto bruto.
- Para el aislamiento de los ingredientes activos de las plantas, la cromatografía en columna es la técnica de separación más preferida y única en fitoquímica.
La cromatografía se utiliza habitualmente en investigaciones químicas y ciencias de la vida para diversos propósitos. La importancia de las técnicas de cromatografía puede verse en su uso generalizado en diversos sectores para una variedad de objetivos. HPLC, GC, TLC, adsorción, partición, afinidad y cromatografía en papel son algunos de los tipos de cromatografía que tienen diversas aplicaciones en distintos campos.
Las aplicaciones generales de la cromatografía son industrias farmacéuticas, industria alimentaria, industria del combustible, análisis ambiental, ciencia forense, biotecnología, procesos bioquímicos y aplicación biológica, estudios de biología molecular, etc.