Isocrático significa que su fase móvil es constante durante todo el tiempo de análisis. El uso de una elución en gradiente implica que la mezcla de disolventes se cambia a lo largo del análisis y, por tanto, afecta a la retención de los componentes.
La principal diferencia entre el sistema de elución HPLC isocrático y de gradiente es que durante el proceso de separación en elución isocrática se utiliza la misma composición y se mantiene la misma polaridad de la fase móvil. En la elución en gradiente, aumenta o disminuye paulatinamente la polaridad de la fase móvil a lo largo del proceso de separación.