Factores que afectan a la cromatografía en columna

La cromatografía en columna es uno de los métodos más efectivos para aislar y purificar sólidos y compuestos líquidos. Es un método sólido-líquido en el que la fase móvil es un líquido y la fase estacionaria es un sólido. El principio básico de la cromatografía en columna es la adsorción. La mezcla de muestra se coloca sobre la columna y se disuelve en el disolvente o fase móvil y viaja por la fase estacionaria. En función de sus afinidades relativas, los analitos se separan en distinta fracción. El proceso de separación o fase móvil se optimiza mediante cromatografía de capa fina (TLC) antes de realizar la cromatografía en columna. Hay 4 tipos de cromatografía en columna disponibles, tales como cromatografía de partición, cromatografía de adsorción, cromatografía de intercambio iónico y cromatografía en hielo.

La separación, la resolución, el tiempo de retención y la eficiencia de la cromatografía en columna depende de distintos factores, algunos de los factores clave incluyen.

La polaridad de la fase móvil: La polaridad de la fase móvil está relacionada con la resolución, el valor Rf y la separación de los analitos, las variaciones drásticas en la polaridad del disolvente pueden afectar al resultado de la cromatografía en columna.

Naturaleza del disolvente: El caudal del disolvente puede verse afectado por su viscosidad. Así, el disolvente tiene una viscosidad baja que es eficiente en comparación con un disolvente más viscoso.

Calidad de los disolventes: Los disolventes de alta calidad pueden dar una reproducibilidad mucho mejor que los disolventes de baja calidad.

Selección de disolventes: Los disolventes o fase móvil utilizados deben ser compatibles con la matriz; en este caso, el TLC es una forma muy eficaz de optimizar la fase móvil.

Velocidad de flujo: Los cambios en el caudal entre los procesos pueden afectar a la eficiencia de la columna; por tanto, los componentes deben aislarse con un caudal adecuado.

Embalaje de la columna: El embalaje de columnas es un aspecto esencial de la resolución, el embalaje adecuado de las columnas es muy crucial para obtener un mejor rendimiento.

Tamaño de la columna: Los cromatógrafos utilizan distintas dimensiones de una columna, depende del proceso y su uso. La longitud, altura y anchura de las columnas son factores importantes para la separación de moléculas, por lo tanto, se deben seleccionar las dimensiones adecuadas de la columna.

El tamaño de partícula del absorbente: El movimiento del adsorbente depende de su superficie, para mejorar la superficie del adsorbente, se puede reducir el tamaño de la partícula y, por tanto, aumenta la actividad del adsorbente.

Presión: El aumento o disminución de la presión entre la separación puede afectar a los resultados.

La temperatura: La temperatura también es un factor importante en la separación cromatográfica porque las variaciones de temperatura pueden afectar al proceso de separación y, en algunos casos, degrada la muestra.