Capacidad de carga de la columna HPLC

La carga de la columna depende de qué muestra es, cómo de limpia o sucia/impureza, cómo de soluble es insolvente y de la fase móvil. Cuando estamos realizando una separación de analitos en HPLC, la columna no debe sobrecargarse porque la respuesta se verá afectada. Como regla habitual, no cargue más del 5% del volumen de la columna. La sobrecarga de volumen y la sobrecarga de masa son los tipos de sobrecarga en cromatografía. En sobrecarga de masa, se inyecta una cantidad excesiva de analito y en sobrecarga de volumen se inyecta una cantidad excesiva de líquido en la columna. La simetría máxima del analito en la cromatografía líquida de alto rendimiento depende de la composición de la fase móvil, columna o fase estacionaria y volumen de muestra utilizado. Si la columna está sobrecargada, afectará a la forma del pico y la altura del pico aumentando el ensanchamiento, la cola y la anchura del pico.

El volumen máximo de inyección en una columna depende de varios parámetros tales como.

Se ha utilizado el tipo de detector, ya que afectará al problema de sensibilidad.
Dimensión de la columna, es decir, tamaño de partícula, diámetro interno y longitud.
Tipo de columna utilizada para separar los componentes.
Una vez optimizado el método analítico, para determinar la capacidad del material de embalaje particular se realiza un estudio de carga en la columna analítica.

Averigüe cuánta masa necesitamos para separar los componentes. Una vez reconocida la masa requerida, pueden utilizarse varias ecuaciones sencillas para calcular el tamaño de la columna necesaria para la purificación. Además, el sistema HPLC preparativo debe tener en cuenta el caudal máximo y la contrapresión y puede limitar el tamaño de la columna.