Diferencia entre el sistema HPLC isocrático y de gradiente

La principal diferencia entre los sistemas isocráticos y de gradiente es que la elución isocrática utiliza una sola composición de fase móvil que tiene la misma polaridad, mientras que la elución de gradiente utiliza más de una fase móvil y puede aumentar o disminuir gradualmente la polaridad del móvil durante todo el proceso de separación.

El HPLC es una técnica analítica para separar, identificar y cuantificar mezclas de muestras. Es una de las herramientas más potentes de la química analítica, ya que tiene importantes ventajas y aplicaciones. El HPLC es un tipo de cromatografía de columna muy avanzado en el que se utiliza a alta presión de hasta 4000 PSI.

Una bomba conduce un disolvente a través de una columna, el material de embalaje de la columna también se conoce como fase adsorbente o estacionaria es un material granular formado típicamente por partículas sólidas como sílice o polímeros. La muestra se inyecta a través de un inyector y los compuestos separados se detectan mediante un detector (UV o PDA), la señal se convierte y podemos ver el pico.

Tabla de contenidos

¿Qué es la elución isocrática?
¿Qué es la elución en gradiente?
Diferencia entre elución isocrática y gradiente

La cromatografía HPLC se clasifica en varios tipos según el principio de separación, el tipo de análisis, los modos cromatográficos, la escala de operación y el modo de elución. Se utilizan principalmente cuatro tipos de HPLC, dependiendo de la fase estacionaria del método: fase inversa, fase normal, exclusión de tamaño e intercambio iónico.

¿Qué es la elución isocrática?

En cromatografía, la elución isocrática se refiere a cuando la fase móvil tiene una concentración constante así como una composición, polaridad y pH constantes a lo largo de la separación del analito. En este método, el ancho del pico en el cromatograma aumenta linealmente con el tiempo de retención (Rt). Sin embargo, tiene algunas limitaciones, como que los picos de elución tardía se vuelven relativamente planos y anchos. Como resultado, estos picos amplios son difíciles de identificar como picos.

Además, la selectividad del modo isocrático no cambia según el tamaño de la columna HPLC. Esto indica que la selectividad no depende del cambio de tamaño de la columna. El diámetro y la longitud de la columna se consideran dimensiones de la columna. Como resultado, los picos eluyen en la misma secuencia.

¿Qué es la elución en gradiente?

En cromatografía, la elución en gradiente se refiere a cuándo varía la concentración de la fase móvil. La composición de la fase móvil en el sistema de gradiente varía a lo largo del recorrido cromatográfico y, por tanto, afecta a la retención del analito. Debido a su amplio factor de retención o factor de capacidad (k), los compuestos que no pueden separarse fácilmente por métodos isocráticos deben separarse mediante un método de gradiente.

Se trabaja utilizando una bomba de gradiente, en la que la fuerza del eluyente aumenta durante la separación cambiando la composición de la fase móvil. Por tanto, se reduce el tiempo de análisis, aumenta la calidad de la separación y aumenta el límite de detección.

Diferencia entre elución isocrática y gradiente:

En cromatografía, la elución isocrática se refiere a cuando la fase móvil tiene una concentración constante, mientras que la elución en gradiente se refiere a cuando la concentración de la fase móvil varía.
El modo isocrático de HPLC fluye una concentración constante de la fase móvil, mientras que el modo de gradiente de HPLC fluye una concentración variable de la fase móvil.
En la elución isocrática, la selectividad no depende de la dimensión de la columna, mientras que en la elución en gradiente, la selectividad cambia con las dimensiones de la columna cambiantes.
En la elución isocrática los picos se vuelven relativamente planos y anchos, mientras que en el gradiente los picos de elución se vuelven relativamente estrechos.
Los picos de elución isocrática tienen mayor cola, fronting y amplitud que el gradiente, mientras que los picos de elución del gradiente proporcionan una forma simétrica nítida (pico gaussiano) con una resolución suficiente que la isocrática.

Hay dos formas distintas de ejecutar el método HPLC, es decir, la elución isocrática y la elución en gradiente. En la elución isocrática se utiliza una mezcla de fase móvil o un sistema de disolventes para separar los componentes de la muestra y es consistente durante todo el tiempo de prueba. No hay cambios en la composición de la fase móvil que se puedan realizar entre toda la carrera del sistema isocrático.

La composición de la fase móvil en el sistema de gradiente varía a lo largo del recorrido cromatográfico y, por tanto, afecta a la retención del análisis. La separación en modo gradiente puede acelerarse o desacelerarse. En el sistema de gradiente, la composición de la fase móvil debe cambiarse con respecto al tiempo, por lo que es un gradiente de flujo si la relación de fase móvil no se modifica durante el proceso de separación de los analitos, entonces se considera una elución isocrática.