La ampliación del pico es causada por una serie de factores que se mencionan aquí, y evitarlos puede ayudar a reducir el ensanchamiento del pico en HPLC.
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- La ampliación del pico está influenciada por el caudal de la fase móvil y el tamaño de las partículas del material de embalaje en las columnas HPLC. Cuanto menor sea la partícula con esta última, mejor será la resolución máxima.
- Las columnas pequeñas y las grandes cantidades de muestra conducen a un ensanchamiento máximo.
- Asegúrese del volumen inyectado y la concentración del componente objetivo en la muestra.
- La composición de la fase móvil en modo gradiente son torres escarpadas que cambian de polar a no polar en muy poco tiempo.
- La precipitación en la muestra provoca una disolución lenta y la liberación del componente; debe centrifugar y filtrar antes de cargarlo en el inyector.
- Comprobar el número de placas teóricas para columnas cromatográficas y regular su carga en consecuencia.
- Utilice la longitud de onda adecuada del analito.
- Si el caudal actual no funciona, puede trabajar con un caudal más alto para obtener una forma de pico simétrica.
- Asegúrese de que no haya fugas entre la columna y el detector.
- Tubo demasiado largo entre la columna y el detector HPLC.
- A veces, el ID del tubo es demasiado grande, lo que hace que el pico se amplíe.
- Hacer factible inyectar la muestra en el mismo disolvente que se utiliza en la fase móvil.
- Compruebe periódicamente el rendimiento de las columnas; las columnas más antiguas reflejan los picos de cola y otros problemas de rendimiento.
- Mientras sólo se utiliza agua en la fase móvil, puede ser esencial gestionar el pH para controlar la carga de las moléculas de interés.
- Se considera que los tampones pueden mejorar la forma del pico cuando se seleccionan en el nivel de pH adecuado para controlar la ionización.
- Puede reducir la ampliación del pico utilizando diferentes tipos de tampones como soluciones de acetato o fosfato, ajustadas al pH adecuado según el valor de pKa de la molécula.
