El mecanismo de separación de la cromatografía en fase inversa

La cromatografía es una técnica de separación primaria que se utiliza en el análisis químico. Aísla la mezcla de muestra mediante la partición continua entre las fases móvil y estacionaria. El principio de la cromatografía implica el aislamiento que se obtiene al disolver compuestos en una fase móvil y viajando sobre una fase estacionaria. Cada compuesto de la mezcla de muestra tiene un tiempo de retención distinto, ya que el compuesto que interacciona fuertemente con la fase estacionaria parece viajar muy lentamente, mientras que los compuestos con menor afinidad tienden a eluir rápidamente.

La cromatografía líquida de alto rendimiento es una de las técnicas de separación más potentes, ya que puede aplicar diferentes tipos de técnicas de separación para diferentes tipos de moléculas. La cromatografía en fase inversa es un tipo de HPLC que actualmente es el método de aislamiento más utilizado en HPLC puesto que es versátil, sencillo, separa los analitos de diversa polaridad y demasiado molecular y tiene mayor alcance de la técnica.

El principio de la cromatografía en fase inversa depende de la interacción de los solutos con el grupo hidrofóbico. Tiene aplicaciones analíticas y preparativas en el campo del aislamiento y la purificación bioquímica. Se caracteriza por una fase móvil de propiedades polares y una fase estacionaria con propiedades no polares. La cromatografía de fase inversa funciona en contraste con la cromatografía de fase normal.

Mecanismo de separación de la cromatografía de fase inversa:

El mecanismo de separación en HPLC de fase inversa depende generalmente de la distribución de componentes entre fase móvil y fase estacionaria. Este proceso también puede interpretarse como un tipo de extracción de componentes entre la fase estacionaria y la fase móvil. En la fase estacionaria, una sustancia no polar se disuelve preferentemente, permanece preferentemente y, por tanto, se eluce gradualmente de la columna cromatográfica. Las sustancias polares se eliminan fácilmente de la columna, puesto que tienden a permanecer en el sistema de disolventes. Posteriormente, el tiempo de retención de los solutos varía según su afinidad distinta por la fase estacionaria.

La fase estacionaria en la cromatografía de fase inversa:

La fase estacionaria del HPLC de fase inversa se compone generalmente de cadenas alquiles hidrofóbicas que interaccionan con los solutos. La sílice unida a la cadena de carbono octadecil (C18) es la columna más popular utilizada en RP-HPLC, puesto que tiene una cadena de carbono más larga en comparación con la C4 y la C8.

La fase móvil de la cromatografía en fase inversa:

La fase móvil utilizada en HPLC de fase inversa tiene cierta cantidad de agua o tampones acuosos y se utilizan disolventes orgánicos para aislar así como para obtener una forma de pico simétrica. Los disolventes miscibles con agua como el metanol, el acetonitrilo y el tetrahidrofurano son los disolventes orgánicos más utilizados. La retención de compuestos ionizables es muy sensible, por tanto, el pH de la fase móvil o tampón puede desempeñar un papel importante.

Las preguntas más frecuentes sobre cromatografía son las siguientes.

¿Por qué es útil la cromatografía en fase inversa?

La RP_HPLC es la técnica más utilizada entre los diferentes tipos de cromatografía HPLC ya que tiene una fase estacionaria hidrófoba y se puede utilizar con las moléculas polares (hidrófilas), no polares (hidrofobas), iónicas e ionizables para aislar sus diferentes moléculas, que depende del procedimiento que se utilice.

¿Qué compuesto eluirá primero en una separación HPLC en fase inversa?

Los compuestos polares eluirán primero en una separación HPLC en fase inversa. La fase móvil polar (acuosa) se utiliza en el HPLC de fase inversa. Como consecuencia, en el sistema de disolventes polares, los solutos hidrofóbicos comienzan a adsorberse en la fase estacionaria hidrófoba, y en la fase móvil, los solutos hidrófilos pasan por la columna y son primeros. eluido.

¿Qué diferencia existe entre la cromatografía de fase normal y la de fase inversa?

La principal diferencia entre la cromatografía en fase inversa y la cromatografía en fase normal es que la cromatografía en fase inversa tiene una fase estacionaria no polar y una fase móvil polar, mientras que la cromatografía en fase normal tiene una fase estacionaria muy polar y una fase no polar.

¿Cuál es la principal ventaja de la cromatografía en fase inversa?

La principal ventaja del HPLC en fase inversa es que su fase estacionaria hidrófoba funciona bien para la retención de la mayoría de analitos orgánicos. Esto permite utilizar la fase móvil acuosa que incluye agua y el tipo de solución tampón como fosfato, acetato, etc. La cromatografía RP también tiene la ventaja de utilizar el pH según el pKa de la molécula para mejorar la separación. .

¿Cuáles son los principales tipos de cromatografía?

Existen varios tipos de cromatografía, como cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), cromatografía de gases (GC), cromatografía en columna, cromatografía en papel, cromatografía de capa fina (TLC) y espectroscopia de masas (LC-MS) , etc.