Aquí se mencionan algunos consejos de selección de tampón para HPLC.
- La selección de tampones adecuados para el análisis depende de las características del tampón, por ejemplo, el rango de pH, el pKa y el corte UV.
- Como regla común, el tampón de pH debe utilizarse con un valor de pKa de +/- 1 compuesto. Los tampones dentro de ese rango resisten el cambio de pH.
- Si el pH de la fase móvil del tampón fosfato es superior a 7, acelerará la disolución de la sílice, dando lugar a daños en la columna o acortará la vida útil de la columna. Normalmente, el rango de pH de RP-HPLC en embalajes a base de sílice es de 2,00 a 8,00.
- Preferiblemente debe escogerse la concentración más baja que produzca resultados reproducibles. Normalmente, una concentración de tampón de 10 a 50 mM es suficiente para la separación de componentes.
- Si la cantidad de modificadores orgánicos en los tampones es baja o no, el crecimiento microbiano puede producirse rápidamente, este crecimiento se acumulará en las entradas de la columna HPLC y puede causar daños y disminuir el rendimiento de la columna. Por tanto, se utilizan soluciones tampón recién preparadas.
- La solución tampón debe filtrarse a través de un filtro de nylon de 0,5 micras.
- La fase móvil del HPLC debe desgasificarse.
- La solubilidad del fosfato es en agua, metanol, acetonitrilo y tetrahidrofurano (THF).
- Algunos tampones de sal son higroscópicos, lo que podría cambiar los resultados de la cromatografía.
- La solubilidad de las sales de amoníaco suele ser en agua o en fases móviles orgánicas.
- El ácido trifluoroacético (TFA) puede degradarse con el paso del tiempo, absorbe el detector UV a longitudes de onda inferiores.
- Los tampones de bicarbonato de amonio son generalmente propensos a cambios de pH y suelen ser estables hasta 48 horas.
- Los tampones de HPLC utilizados habitualmente son el acetato de amonio, el formato de amonio, el dihidrógeno fosfato de potasio o el ácido fosfórico, el hidróxido de amonio, el ácido trifluoroacético, el ácido fórmico, etc .
- Hoy en día, los problemas más comunes asociados con la compatibilidad con la detección, el formato y los buffers de acetato de espectroscopia de masas son opciones ideales.
