¿Por qué utilizar ácido fórmico en LC-MS?

La LC-MS (cromatografía líquida-espectrometría de masas) separa los analitos dentro de una solución de muestra y da una masa que puede ayudar a proporcionar la identificación estructural del compuesto. Esta técnica de separación depende de la retención dispar de los analitos en una fase estacionaria.

La cromatografía líquida/espectroscopia de masas (LC/MS) es un método que combina la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), una potente técnica de separación analítica, con la espectroscopia de masas, una potente herramienta de análisis y detección analítica. La ionización por electrospray (ESI) y la ionización química a presión atmosférica (APCI) son la ionización a presión atmosférica (API) popular en procesos LC/MS; ambos son la técnica de ionización suave. La mayoría de las separaciones cromatográficas son compatibles con estas dos técnicas. La mayoría de los disolventes volátiles de fase móvil y los tampones volátiles también son compatibles con el proceso API.

Los disolventes se seleccionan normalmente en función de la solubilidad y compatibilidad de un compuesto con distintas técnicas de ionización utilizadas en LC/MS. Para mejorar la forma máxima de las moléculas, muchos analistas utilizan la baja concentración de ácido fórmico en el sistema de disolventes. Se ha utilizado ampliamente como modificadores en la fase móvil. Esto se debe a la capacidad relativamente baja del ácido fórmico para suprimir la detección de iones en el momento del análisis MS ligero mediante la ionización electrospray (ESI) de las muestras.

Para mejorar la separación de los analitos en cromatografía líquida, si es necesario disminuir el pH de la fase móvil en este caso, el ácido acético y fórmico son los más adecuados. El ácido fórmico es más fuerte que el ácido acético; en consecuencia, debe añadirse menos para alcanzar el pH requerido. La supresión del ácido es sobre el ion en análisis de iones en modo negativo; no se pueden formar compuestos ácidos débiles.

• El ácido fórmico es el componente más común de las fases móviles de fase inversa cuando se utilizan métodos de cromatografía líquida-espectrometría de masas (LC-MS) porque proporciona protones para el análisis LC-MS en modo de ionización positiva mediante la generación. [M+H]+ iones.
• Los pesos moleculares más bajos generan menos interferencias: el peso molecular del ácido fórmico es menor que el del ácido acético y el trifluoroacetato. Estos ácidos se observan como componentes desprotonados y dímeros desprotonados en el análisis de iones negativos.
• Permite mantener el silanol residual en forma no disociada en fases móviles de pH bajo, lo que inhibe la adsorción (quea) de los analitos básicos.
• Las moléculas básicas se analizan a menudo mediante fases móviles de ácido añadido, mientras que los productos farmacéuticos y otras moléculas básicas se analizan con frecuencia mediante el análisis LC-MS.
• Normalmente se considera que los disolventes de ácido fórmico tienen menores niveles de contaminación en comparación con las fases móviles de ácido acético cuando se trata de prevenir la contaminación de las fases móviles preparadas.
• A diferencia del ácido acético, el ácido fórmico tiene un olor menos desagradable, pero no es un problema científico. Debido a su olor, el ácido acético se sustituye con frecuencia por ácido fórmico.
• El ácido fórmico se utiliza como componente tampón en la cromatografía líquida, que es una de sus aplicaciones más importantes. Se utiliza cuando debe ajustarse el pH de las fases móviles acuosas para completar la separación del soluto objetivo con características ácido-básicas.

Los disolventes y tampones útiles en el sistema de fase móvil de LC-MS son agua, acetonitrilo, metanol, etanol, propanol, isopropanol, ácido acético, ácido fórmico, hidróxido de amonio, formado de amonio (10 mm o menos), acetato de amonio (10 mm). o menos), y sales no volátiles (fosfato, borado, citrato), etc.