¿Qué causa los picos anchos en HPLC?

La presencia de picos inusualmente anchos es a veces un problema que se encuentra en la separación por cromatografía líquida. Este problema ocurre regularmente en la separación isocrática; sin embargo, esto también puede ocurrir con la elución en gradiente. El ensanchamiento del pico en HPLC está influenciado por el caudal de la fase móvil y el tamaño de partícula del material de relleno de la columna. Cuanto más pequeña sea la partícula con este último, mejor será la resolución máxima. Se recomienda que los cromatógrafos intenten optimizar la composición y el caudal de la fase móvil y verifiquen el tipo de columna utilizada.

El ensanchamiento de los picos en la cromatografía líquida de alta resolución se debe a varios factores que se mencionan a continuación.

En muy poco tiempo, varios pasos de elución en gradiente cambian de polar a no polar.
Algunos precipitan en la solución de muestra.
Sobrecarga de columna (demasiada carga de muestra)
Tiempo de retención (RT) demasiado largo
Demasiado volumen extra-columna
Tiempo de detección demasiado lento
Mala solubilidad de la muestra
Bucles de muestra incompletamente llenos
Saturación del detector
columna contaminada
pH incorrecto de la fase móvil o del tampón