La cromatografía líquida de alto rendimiento es un tipo de cromatografía que se refiere al uso en química analítica para identificar, separar e identificar cada molécula de una mezcla de muestra. Para aislar los compuestos se utilizan los tipos de HPLC tales como la fase inversa, la fase normal, la exclusión de tamaño y el intercambio iónico, de éstos, RP-HPLC es el más utilizado. La selección de columnas para el análisis HPLC se basa principalmente en la solubilidad de los compuestos en disolventes. Las muestras de HPLC son normalmente moléculas orgánicas que difieren en propiedades y estructuras tales como polaridad, tamaño, pH y funcionalidad. Algunas moléculas tienen funcionalidad iónica; a menudo necesitan una modificación de la fuerza iónica o del pH de la fase móvil en la forma simétrica del pico.
Existen diferentes tipos de columnas utilizadas en HPLC, pero la C18 es la fase estacionaria más utilizada en HPLC de fase inversa. El C18 (Octildecilsilano) es de naturaleza hidrófoba que tiene una cadena de carbono unida a las partículas de sílice dentro de la columna. Tiene 18 carbonos que se unen a la sílice, que es más y una cadena de carbonos más larga que la C8 (8 carbonos) y C4 (4 carbonos). Al tener una mayor cadena de carbono, tiene una superficie mayor que da un tiempo más de interacción entre los analitos y las fases unidas. Como resultado, los solutos se separan gradualmente de la columna con mayor separación. En esta fase, los compuestos no polares interactuarán mientras viajan por la fase estacionaria. Por tanto, si la mezcla de muestra contiene dos compuestos y si un compuesto es más hidrófobo, entonces el compuesto menos hidrofóbico eluiría más rápidamente que los compuestos más hidrofóbicos.
Tanto C18 como C8 son columnas RP-HPLC y se refieren a la cadena alquilo de la fase unida. Las columnas C18 pueden estar disponibles en varios tamaños, tales como longitud, diámetro, hidrofobicidad, tamaño de partículas y la capacidad de separar componentes ácidos y básicos. Por lo general, las columnas están disponibles en 30 mm a 250 mm de longitud, 3µ a 5µ de tamaño de poro y 01 a 05 mm de diámetro. La columna HPLC C18 se utiliza principalmente en análisis farmacéuticos, ciencias ambientales, análisis químicos, así como algunas aplicaciones industriales, para el análisis cualitativo y cuantitativo de muestras. Las columnas C18, C8, C30, C4, C1, alquilo de fase inversa y fenil son los distintos tipos de columnas que se utilizan en RP-HPLC. C18 es el más utilizado.
Gel de sílice:
El gel de sílice es el material de embalaje más utilizado o como fase estacionaria en distintos tipos de cromatografía tales como HPLC, TLC, cromatografía en columna y HPTLC. Es ligeramente ácida y polar, tiene dos tipos como la forma esférica y la irregular. El gel de sílice que se utiliza en la cromatografía líquida tiene un poro en su superficie, que da una superficie mayor que los poros sin ella. La columna de 5 μm es la columna HPLC más utilizada.
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Selección de la columna para RP-HPLCLas preguntas más frecuentes sobre columnas HPLC son las siguientes.
¿Por qué se utiliza la columna c18 en HPLC?
La C18 es la columna más utilizada en HPLC en fase inversa, puesto que puede aislar una amplia gama de componentes en comparación con otros tipos de columnas.
Lectura relacionada:
El mecanismo de separación de la cromatografía en fase inversa¿Cuántos tipos de columnas HPLC existen?
Existe una variedad de columnas HPLC disponibles para cromatografía líquida, dependiendo de la composición y del mecanismo de separación, es decir, cromatografía de fase inversa, fase normal, intercambio iónico y exclusión de tamaño.
¿Qué diferencia existe entre las columnas HPLC c8 y c18?
Lectura relacionada:Cromatografía de fase inversa: una visión generalLa diferencia entre C8 y C18 es que el empaquetamiento de la columna en C8 tiene 8 átomos de carbono unidos a sílice mientras que C18 tiene 18 átomos de carbono unidos a sílice.
¿La columna c18 es polar o no polar?
La columna está llena de partículas muy pequeñas de hielo de sílice. La superficie de sílice utilizada en la columna es polar ya que está cubierta de silanoles.
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