¿Qué es la cromatografía de exclusión de tamaño?
La cromatografía de exclusión de tamaño es un tipo de cromatografía también conocida como cromatografía en hielo. Es una técnica de separación potente basada en el tamaño molecular de los componentes, que se utiliza para separar a los componentes, especialmente el espacio de alta masa molecular. En este método, el material poroso se utiliza como fase estacionaria y el líquido se utiliza como fase móvil. La separación se logra mediante la exclusión diferencial de los componentes de la muestra mientras pasan a través de una cama de partículas porosas de los poros del material de embalaje.
Mecanismo de separación de la cromatografía de exclusión de tamaño:
La cama de columna de exclusión de tamaño tiene tres componentes prácticos, es decir, el volumen de poro, el volumen vacío y el volumen de la matriz.
El volumen de poro: El volumen de poro corresponde al espacio de poro-lumen dentro de las partículas.
El volumen vacío: Se refiere al volumen excluido, esto es, el espacio entre las partículas.
El volumen de la matriz: Se refiere al componente sólido de las partículas que llenan la cama de la columna.
Los mayores analitos que el tamaño del poro no pueden penetrar en el agujero y se separan como primer pico del cromatograma. Los analitos que pueden entrar en los poros tendrán un tiempo medio de residencia en sus partículas que depende del tamaño y la forma de los analitos. Por tanto, diferentes analíticas tienen un tiempo total de viaje diferente a través de columnas cromatográficas. Los analitos tienen un pequeño tamaño y residen los más largos en la columna, que eluyeron juntos en forma del último pico del cromatograma.
Diferentes tipos de cromatografía de exclusión de tamaño:
Existen dos tipos básicos de cromatografía de exclusión de tamaño son la cromatografía de permeación de hielo (GPC) y la cromatografía de filtración de hielo (GFC).
Cromatografía de permeación en hielo: En este tipo de cromatografía de exclusión de tamaño, se utiliza un material de embalaje de columna hidrófoba y un disolvente orgánico no acuoso para determinar la distribución del peso molecular de la molécula.
Cromatografía de filtración en hielo: En este tipo de cromatografía de exclusión de tamaño utiliza un material de embalaje hidrófilo de columnas y una fase móvil acuosa para separar y determina la distribución del peso molecular de las moléculas solubles en agua.
Principio de cromatografía de exclusión de tamaño:
La selección de analitos en función de su tamaño y forma molecular utiliza las propiedades del tamiz molecular de una diversidad de materiales porosos. Posiblemente el más utilizado de estos materiales es un grupo de compuestos orgánicos poliméricos que tienen una red de poro tridimensional que les confiere propiedades de hielo. El principio básico de la cromatografía de exclusión es bastante fácil. La partícula de hielo de la columna está en equilibrio con un disolvente efectivo o una fase móvil para separar las moléculas. Los componentes de gran tamaño que se excluyen de los poros pueden pasar por los espacios intersticiales, ya que los componentes de menor tamaño se distribuyen entre la fase móvil dentro y fuera del tamiz molecular y después pasan a una velocidad más baja por la columna.
Las preguntas más frecuentes sobre cromatografía son las siguientes.
¿Para qué sirve la cromatografía de exclusión de tamaño?
La cromatografía de exclusión de tamaño se utiliza principalmente para separar compuestos según su tamaño molecular. También se utiliza para la purificación, determinación del peso molecular, la desalación y los estudios de unión a proteínas.
¿Cuál es la fase estacionaria en la cromatografía de exclusión de tamaño?
La fase estacionaria si la cromatografía de exclusión de tamaño consiste en una columna que está disponible comercialmente con un grupo de diferentes tamaños de poro de material de embalaje. La columna de la SEC está llena de perlas finas y porosas, hechas de polímero de dextrano, agarosa o poliacrilamida.
¿Por qué es importante la cromatografía de exclusión de tamaño?
La cromatografía de exclusión de tamaño es una técnica importante en el fraccionamiento de proteínas, determinando la estructura fina de los analitos, el fraccionamiento de polímeros solubles en agua, así como la cantidad relativa de ciertos analitos en los alimentos.
