¿Qué es la cromatografía de intercambio iónico?
La cromatografía de intercambio iónico es una técnica de separación que permite a los intercambiadores de iones separar iones y moléculas polares en función de su afinidad. Es el tipo de cromatografía líquida más potente, ya que este método permite el análisis de una amplia gama de moléculas. Este método permite el aislamiento de tipos relacionados de analitos que no sería posible aislar con otras técnicas, puesto que la carga que lleva la molécula interesada se puede controlar fácilmente ajustando el pH del tampón.
Mecanismo de separación de la cromatografía de intercambio iónico:
El intercambio iónico es un mecanismo de separación que depende de la fuerza iónica relativa de los solutos. La fase estacionaria es una sustancia cargada con carga opuesta, que preferiría conservar especias. Una fase estacionaria cargada positivamente en el intercambio de aniones-HPLC mantiene una especie cargada negativamente. Para un intercambio catiónico, es cierto lo contrario. En la cromatografía iónica, la elución de los analitos está influenciada por el pH de la fase móvil, la fuerza iónica y la temperatura de trabajo del sistema. Las columnas de intercambio iónico tienen distintas ventajas respecto al soporte basado en sílice; pueden utilizar todo el rango de pH y altas temperaturas. La cromatografía iónica reduce el pretratamiento de la mezcla de muestra y mejora la precisión y exactitud de los resultados.
Principio de la cromatografía de intercambio iónico:
La cromatografía de intercambio iónico depende de la atracción entre la fase estacionaria de carga opuesta, que se llama intercambio iónico. El intercambio iónico consiste en un medio de soporte inerte unido de forma covalente a los grupos funcionales que pueden ser positivos o negativos. Los iones de carga opuesta están unidos a estos grupos funcionales ligados de forma covalente, que se intercambiarían con iones cargados en la mezcla de muestra con una magnitud de carga superior a los iones unidos a la matriz. En consecuencia, si se ejecuta la cromatografía de intercambio de aniones, los compuestos cargados negativamente pueden interactuar más con la fase estacionaria e intercambiarse por los iones cargados, que ya están unidos a la matriz.
Procedimiento de cromatografía de intercambio iónico:
- Las separaciones en cromatografía de intercambio iónico se realizan generalmente en una columna que está empaquetada con un intercambiador de iones y se preparan de divinilo-benceno y estireno.
- La selección del intercambiador depende de la partícula a aislar. El intercambiador aniónico se utiliza para separar los aniones y para separar los cationes se utiliza el intercambiador catiónico.
- El primer paso del IEC, el intercambiador de iones se llena en la columna y después se aplica una muestra de tampón.
- El tampón Tris, el tampón acetato, la piridina, el tampón fosfato y el tampón citrato se utilizan ampliamente.
- Los analitos que tienen mayor afinidad hacia el intercambiador de iones, se moverán hacia abajo con tampón. En el siguiente paso del IEC, las partículas estrechamente atadas se separan mediante un tampón compatible.
- Tras la separación de estas partículas, se analizan espectroscópicamente.
- En el último paso, el sistema debe reequilibrarse para la siguiente purificación en condiciones iniciales.
Tipo de cromatografía de intercambio iónico:
En este método se pueden utilizar dos tipos de intercambiadores, a saber, intercambiadores catiónicos y aniónicos.
Intercambiadores catiónicos: Tiene grupos cargados negativamente y esto atraería a grupos cargados positivamente.
Intercambiadores aniónicos: Consiste en grupos cargados positivamente y esto atraería moléculas cargadas negativamente.
Las preguntas más frecuentes sobre cromatografía son las siguientes.
¿Cuáles son las aplicaciones de la cromatografía de intercambio iónico?
La cromatografía de intercambio iónico es la más utilizada en la industria farmacéutica, agrícola, biotecnológica, medioambiental y otras para la purificación de diferentes proteínas, ácidos nucleicos, polipéptidos, antibióticos y otras biomoléculas cargadas.
¿Cuál es el uso del supresor en la cromatografía iónica?
El supresor se encuentra entre un detector y la columna y sirve para reducir la conductividad de fondo del eluyente y aumentar la conductividad de las moléculas.
¿Cuál es la fase móvil en la cromatografía de intercambio iónico?
La fase móvil de la cromatografía de intercambio iónico se compone de una solución acuosa de una sal adecuada o una mezcla de sales y algún porcentaje de disolvente orgánico.
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