La selección del mejor sistema de disolventes para la cromatografía en columna requiere un acto de equilibrio entre las polaridades del disolvente y compost. Para la mayoría de separaciones, el disolvente será menos polar que los compuestos y compuestos también serán solubles en el disolvente para que no se adsorban permanentemente.
El principio de la cromatografía en columna es la adsorción de las moléculas por la fase estacionaria. Existen cuatro tipos distintos de cromatografía en columna según el mecanismo de trabajo, tales como la cromatografía de adsorción, la cromatografía de intercambio iónico, la cromatografía de partición, la cromatografía en hielo. Las aplicaciones de la cromatografía en columna consisten en productos farmacéuticos y también se utiliza para la purificación de solutos.
La comodidad y versatilidad de la cromatografía en columna le han convertido en una de las técnicas de separación de componentes más utilizadas. La cromatografía en columna también es capaz de separar una serie de analitos de una mezcla de muestra. Una ventaja más de la cromatografía en columna es que el uso de esta técnica de purificación no requiere mucha información sobre las propiedades físicas del compost, lo que hace que este método sea extremadamente valioso a la hora de separar nuevos analitos.
Si las características químicas de su mezcla de muestra son más complejas, existen algunas opciones disponibles para separar los analitos puros. La velocidad de viaje de un compuesto a través de la columna depende extremadamente del uso de la fase móvil. Normalmente, el disolvente más polar puede hacer que el compuesto viaje rápidamente por la columna. Para la fase sólida, los disolventes polares incluyen una mejor afinidad, permiten que los compuestos eluyan más rápidamente. Se debe tener cuidado de confirmar que el sistema de disolventes seleccionado para la cromatografía en columna tiene la polaridad adecuada para realizar la separación entre los compuestos de la mezcla de muestra. La selección del disolvente o fase móvil es significativa para la separación por cromatografía en columna.
Para reconocer un mejor sistema de disolventes para la cromatografía en columna, debe realizarse una secuencia de ensayos de cromatografía en capa fina (TLC) antes de realizar los experimentos. Para utilizar un sistema de disolvente binario, puede ser necesario en algunos casos. El disolvente o sistema móvil utilizado depende del comportamiento del componente de la muestra sobre el gel de sílice. Por lo general, seleccionamos un disolvente o un sistema móvil en el que el compuesto que queremos separar tenga un valor Rf de aproximadamente 0,3, aunque muchos analistas ejecutan sistemas de gradiente. Empieza con hexano, y después aumenta gradualmente la polaridad del disolvente hasta que el compuesto se eluye. También es el método de HPLC.
Para reconocer un mejor sistema de disolventes para la cromatografía en columna, debe realizarse una secuencia de ensayos de cromatografía en capa fina (TLC) antes de realizar los experimentos. Para utilizar un sistema de disolvente binario, puede ser necesario en algunos casos. El disolvente o sistema móvil utilizado depende del comportamiento del componente de la muestra sobre el gel de sílice. Por lo general, seleccionamos un disolvente o un sistema móvil en el que el compuesto que queremos separar tenga un valor Rf de aproximadamente 0,3, aunque muchos analistas ejecutan sistemas de gradiente. Empieza con hexano, y después aumenta gradualmente la polaridad del disolvente hasta que el compuesto se eluye. También es el método de HPLC.
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