Aprende a Hacer un Tampón TAE en unos Pocos Pasos

El tampón TAE es una solución compuesta de base Tris, ácido acético y EDTA (Tris-acetato-EDTA). Históricamente, es el tampón más común utilizado para la electroforesis en gel de agarosa en los análisis de productos de ADN resultantes de la amplificación por PCR, protocolos de purificación de ADN o experimentos de clonación de ADN.

Este tampón tiene baja fuerza iónica y baja capacidad de tamponamiento. Es el más adecuado para la electroforesis de piezas de ADN grandes (>20 kilobases) y necesitará reemplazarse con frecuencia o recircularse durante tiempos de funcionamiento en gel más largos (>4 horas). Con esto en mente, es posible que desee considerar hacer varios lotes del búfer.

Dado que el tampón es fácil de hacer y los pasos se pueden llevar a cabo rápidamente, hacer más de un lote a la vez no debería llevar mucho tiempo ni ser difícil. Siguiendo las instrucciones a continuación, debería tomar solo 30 minutos preparar el tampón TAE.

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Lo que Necesitas para el Buffer TAE

Dado que hacer el tampón TAE solo requiere un conjunto de instrucciones rápido y simple, la cantidad de materiales necesarios para ello no es excesiva. Solo necesitará sal disódica EDTA (ácido etilendiaminotetraacético), base Tris y ácido acético glacial.

La fabricación del tampón también requiere un medidor de pH y estándares de calibración, según corresponda. También necesitarás vasos de precipitados o matraces de 600 mililitros y 1500 mililitros, así como cilindros graduados. Por último, necesitarás agua desionizada, barras para revolver y placas para revolver.

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Preparar una Solución Madre de EDTA

Se prepara una solución de EDTA con antelación. El EDTA no entrará completamente en una solución hasta que el pH se ajuste a aproximadamente 8,0. Para una solución madre de 500 mililitros de EDTA 0,5 M (molaridad o concentración), pesar 93,05 gramos de sal disódica de EDTA (FW = 372,2). Disolverlo en 400 mililitros de agua desionizada y ajustar el pH con hidróxido de sodio (NaOH). Rellenar la solución hasta un volumen final de 500 mililitros.

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Cree Su Solución de Stock

Preparar una solución madre concentrada (50x) de TAE pesando 242 gramos de base Tris (FW = 121,14) y disolviéndola en aproximadamente 750 mililitros de agua desionizada. Añadir cuidadosamente 57,1 mililitros de ácido glacial y 100 mililitros de EDTA 0,5 M (pH 8,0).

Después de eso, ajuste la solución a un volumen final de 1 litro. Esta solución madre se puede almacenar a temperatura ambiente. El pH de este tampón no se ajusta y debe ser de aproximadamente 8,5.

Preparar una Solución de Trabajo de Tampón TAE

La solución de trabajo de tampón TAE 1x se prepara simplemente diluyendo la solución madre 50x en agua desionizada. Las concentraciones finales de soluto son Tris-acetato 40 mM (milimolar) y EDTA 1 mM. El tampón está ahora listo para su uso en la ejecución de un gel de agarosa.

Terminando

Revise el inventario antes de comenzar para asegurarse de tener todos los materiales anteriores para el tampón TAE. Su personal de suministros debe poder decirle si tienen todos los artículos que necesita en existencia. No querrás terminar perdiéndote algo en medio del procedimiento.