Cómo Liofilizar un Cultivo Bacteriano (Liofilización)

La liofilización, también llamada liofilización o criodesecación, es el proceso de eliminar el agua de un producto después de congelarlo y colocarlo al vacío. Esto permite que el hielo cambie de sólido a vapor, sin pasar por una fase líquida.

El hielo (u otros disolventes congelados) se eliminan de un producto a través del proceso de sublimación y las moléculas de agua unidas se eliminan a través del proceso de desorción.

Los Fundamentos de la Liofilización

Una de las mejores maneras de almacenar un cultivo de bacterias, hongos, levaduras u otros microorganismos durante largos períodos de tiempo es utilizar el proceso de liofilización. Este breve procedimiento de laboratorio se puede realizar con cualquier liofilizador disponible comercialmente que preserve su colección de cultivos.

Debido a que la liofilización es la forma de secado más compleja y costosa, el proceso generalmente se restringe a materiales delicados y sensibles al calor de alto valor. Las sustancias que no se dañan por congelación generalmente se pueden liofilizar para que el almacenamiento refrigerado sea innecesario.

Este proceso puede durar tan solo tres horas, o hasta 24 horas (sin incluir el tiempo de crecimiento del cultivo).

Productos Que Necesitará

• Liofilizador
• Autoclave
• Placas de agar nutritivas u otras apropiadas
• Incubadora para hacer crecer el cultivo
• Varilla de vidrio
• Tampón de liofilización
• Viales con tapa de engarzado con tapones de goma (y un engarzador para aplicar las tapas)
• Congelador

El Proceso Paso a Paso de la Liofilización

1. Haga crecer su cultivo nocturno, o césped, del microorganismo en caldo Luria u otras placas de agar nutriente apropiadas.
2. Prepare los viales estériles con tapa de crimpado en autoclave (método de esterilización con vapor, presión y calor) con anticipación, con las tapas (tapones de goma) colocadas sin apretar en la parte superior. Coloque etiquetas de papel impresas con la identificación del cultivo dentro de los tubos antes de esterilizarlos en autoclave. Alternativamente, use tubos con tapas diseñadas para esterilidad.
3. Añadir 4 mililitros de tampón de liofilización a la placa. Si es necesario, las células se pueden suspender usando una varilla de vidrio estéril.
4. Transferir rápidamente la suspensión de cultivo a los viales esterilizados. Añadir aproximadamente 1,5 mililitros por vial. Selle con la tapa de goma.
5. Congelar la suspensión de cultivo dentro de los viales colocando los viales en un congelador a menos 20 grados Celsius.
6. Una vez congelados los cultivos, prepare el liofilizador encendiéndolo y dejando tiempo para que se estabilicen las condiciones de temperatura y vacío apropiadas. Haga esto de acuerdo con las instrucciones del fabricante para la marca particular de liofilizador que está utilizando.
7. Con cuidado y asépticamente, coloque las tapas de los viales sin apretar en la parte superior de los viales para que la humedad pueda escapar durante el proceso de liofilización. Coloque los viales en una cámara de liofilizador y aplique el vacío a la cámara de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
8. Permita que el tiempo de cultivo se liofilice completamente(se seque). Esto puede variar desde unas pocas horas hasta toda la noche, según el volumen de cada muestra y la cantidad de muestras que tenga.
9. Retire las muestras de la cámara del liofilizador de acuerdo con las instrucciones del fabricante e inmediatamente selle los viales con la tapa de goma y engarce las partes superiores.
10. Almacene la colección de cultivo liofilizado a temperatura ambiente.