Ensayo de Fenilalanina Desaminasa: Procedimiento, Principio y Usos

La prueba de la desaminasa de la fenilalanina es un procedimiento usado para descubrir la capacidad de la especie del Proteus de desaminar la fenilalanina al ácido fenilpirúvico con la ayuda de una enzima; una reacción vital y útil en la distinción de los miembros de la familia de Enterobacteriaceae.

Específicamente, se utiliza para diferenciar los organismos Proteus y Providencia de la familia Enterobacteriaceae.

Usando la Prueba de fenilalanina Desaminasa, se identificará la capacidad del organismo para producir enzima desaminasa. Lo que hace esta enzima es que elimina el grupo amina del aminoácido fenilalanina y termina produciendo ácido fenilpirúvico y amoníaco.

El medio usado para este ensayo es agar de fenilalanina / fenilalanina desaminasa y contiene DL-fenilalanina y se usa nutriente para analizar el medio. ^{(1, 2, 3 y 4)}

Imagen 1: El tubo de ensayo de la prueba de fenilalanina desaminasa negativa permanece del mismo color, mientras que el que resultó positivo tiene una decoloración verde.
Fuente de Imagen: slideplayer.com

Imagen 2: Reactivos usados para TET de fenilalanina desaminasa.
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Propósito de la prueba de fenilalanina desaminasa

El objetivo principal de la prueba de fenilalanina desaminasa es determinar si el microbio produce la enzima fenilalanina desaminasa, que es vital para que utilice el aminoácido fenilalanina como fuente de carbono y energía para crecer. ^{(4, 5)}

Composiciones de agar de fenilalanina inclinado

• Cloruro de sodio
• Extracto de levadura
• Fosfato disódico
• Agar
• DL-Fenilalanina
• pH final a 25 ° C de temperatura ⁽⁵⁾

Preparación del agar inclinado

• Suspender 26 gramos en 1 litro de agua destilada.
• Llevar a ebullición hasta que el medio se disuelva por completo.
• Dispensar en el tubo y autoclave durante 15 minutos a 121 grados Celsius.
• Deje que el medio se enfríe colocando el tubo en una posición inclinada.

Nota: después del tratamiento en autoclave, el medio debe ser de color ámbar claro. También notará una formación de gel ligeramente opalescente en el tubo. ^{(4, 5, 6 y 7)}

¿Cómo se realiza el procedimiento?

1. El inóculo de un cultivo puro se transfiere a un tubo que contiene agar de fenilalanina para rayar la pendiente.
2. El tubo se incuba durante 24 horas a una temperatura de 35-37 ° C.
3. Se añade un reactivo para determinar el resultado. ^{(6, 7)}

¿Qué tipo de reactivo se añade?

Los reactivos añadidos son cloruro férrico al 10% y HCl 0,1 N, cinco gotas cada uno. El tubo se agita y el resultado se interpreta en cinco minutos. ^{(7, 8)}

Pasos a seguir al inocular el medio

• Elija el medio inclinado de agar con fenilalanina.
• Enciende el quemador Bunsen.
• Elija la herramienta de bucle de inoculación y esterilícela colocándola en el fuego en el quemador Bunsen.
• Retire la tapa del tubo de ensayo y flamee la boca del tubo de ensayo.
• Usando la herramienta de inoculación estéril, recoja el inóculo del tubo de cultivo y transfiera el inóculo al medio estéril.
• Abra la boca del tubo de ensayo y vuelva a colocar la tapa.
• Vuelva a encender la herramienta de inoculación. ^{(4, 7 y 8)}

Incubar el medio inoculado

• Poner el tubo inoculado dentro de la incubadora a una temperatura de 35 a 37 ° C.
• Déjelo en la incubadora durante al menos 24 horas. ^{(9, 10)}

Adición de los reactivos

• Elija la herramienta cuentagotas y los reactivos adecuados.
• Retire la tapa del tubo y coloque el extremo del gotero en el tubo de ensayo.
• Añadir reactivo de cloruro férrico al 10% a la muestra.
• Coloque el extremo del gotero en el tubo de ensayo y agregue el siguiente reactivo de HCl 0,1 N a la muestra. ^{(1, 4 y 7)}

Imagen 3: La imagen explica la decoloración verde de la inclinación del tubo de ensayo que indica un resultado positivo.
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Interpretación de Resultados

Resultado Positivo

La prueba es positiva si el medio se vuelve verde oscuro. El color verde es el resultado del producto de degradación producido a partir de fenilalanina. Eventualmente se combinará con el compuesto de hierro en el ambiente ácido que conduce a un color verde oscuro.  Ejemplos de organismos que dan positivo en la prueba de fenilalanina desaminasa son:

• Proteus sp
• Morganella sp
• Providenica sp
• Proteus vulgaris
• Proteus mirabilis
• Providencia alcalifaciens
• Providencia alcalifaciens ^{(3, 6 y 10)}

Resultado Negativo

El resultado es negativo si el color del medio no ha cambiado. Permanece de color pajizo a amarillo. Ejemplos de organismos que dan negativo en la prueba de fenilalanina desaminasa son:

• Escherichia coli
• Enterobacter aerogenes

Nota: El resultado debe interpretarse dentro de los cinco minutos posteriores a la adición del reactivo. Los cambios de color se desvanecen rápidamente, por lo que es imprescindible interpretar el resultado de inmediato. ^{(2, 4 y 8)}

Referencia

1. https://microbeonline.com/phenylalanine-deaminase-test-principle-procedure-results-uses/
2. http://www.austincc.edu/microbugz/phenylalanine_deaminase_test.php
3. http://www.vumicro.com/vumie/help/VUMICRO/Phenylalanine_deaminase_Test.htm
4. https://quizlet.com/71417469/phenylalanine-deaminase-test-micro-flash-cards/
5. https://www.coursehero.com/file/p1giid/The-phenylalanine-deaminase-test-was-done-to-determine-if-the-bacteria-has/
6. https://www.studyblue.com/notes/note/n/phenylalanine-deaminase-test/deck/6258000
7. https://en.wikipedia.org/wiki/Phenylalanine_ammonia-lyase
8. http://comenius.aeprosa.pt/wp.php/?p=13331859.html
9. https://mltgeeks.com/phenylalanine-deamination-test-procedure-and-result-interpretation/
10. https://microbenotes.com/phenylalanine-deaminase-test/