Prueba de Desoxirribonucleasa (ADNasa): Principio, Procedimiento, Usos, Interpretación de Resultados

Se realiza una prueba de desoxirribonucleasa (ADNasa) para determinar la capacidad del organismo para hidrolizar el ADN y usarlo como fuente de carbono, que a su vez se utilizará como energía para que el organismo crezca.

Un medio de agar de ADNasa, de color verde pálido que se usa principalmente como medio diferencial. Tiene los nutrientes que necesitan las bacterias para crecer.

El organismo en el medio tiene la capacidad de producir desoxirribonucleasa si ha descompuesto el ADN en fragmentos más pequeños. Un indicador de que el ADN se ha descompuesto es cuando no se une al verde de metilo. El color eventualmente se desvanecerá y notará que hay una zona incolora que rodea la colonia. ^{(1, 2, 3 y 4)}

Imagen 1: Una prueba de hidrólisis de ADN; los cuadrantes A y B dan positivo, mientras que el cuadrante C da negativo.
Fuente de Imagen: wp.com

Imagen 2: Una prueba de ADNasa positiva se caracteriza por una zona clara alrededor de la línea de inoculación. La prueba es negativa si el agar permanece verde y transparente en todo momento
Fuente de Imagen: bioscience.com.pk

¿Cuáles son los usos de la prueba de ADNasa?

• Se realiza para averiguar la capacidad del organismo para hidrolizar el ácido desoxirribonucleico.
• Ayuda a diferenciar Staphylococcus aureus, que tiene la capacidad de producir enzima desoxirribonucleasa de otros estafilococos que no tienen la capacidad de producir ADNasa.
• Se puede usar para realizar una prueba de coagulasa, especialmente cuando no hay plasma disponible. También es una prueba más confiable que la prueba de coagulasa, ya que hay ocasiones en que el resultado de la prueba de coagulasa es difícil de interpretar.
• Tiene la capacidad de distinguir M. catarrhalis de diplococos gramnegativos de origen humano tales como N. gonorrhoea y N. meningitidis. ^{(3, 4, 5 y 6)}

¿Cuáles son los requisitos?

• Medio
  • Agar de ADNasa (con indicador verde de metilo)
• Reactivo
  • Ácido clorhídrico, pero solo se usa cuando el medio no tiene un indicador.
• Quemador Bunsen
• Bucle de inoculación ⁽⁵⁾

¿Cómo se realiza una prueba de Desoxirribonucleasa (ADNasa)?

Nota: Asegúrese de que la superficie de la placa de agar esté limpia y seca. Divida la placa de agar en tres partes simplemente dibujando líneas en la placa. ⁽⁷⁾

Imagen 3: El lado izquierdo de la placa es negativo, mientras que el lado derecho es positivo para la prueba de ADNasa.
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Inoculación

La inoculación se puede hacer de dos maneras. Estos son los siguientes:

1. Inoculación Puntual – usando un lazo, se toca una colonia del organismo y se inocula en un área pequeña de la placa. Por lo general, se coloca en el centro de una de las secciones de la placa. Después de la incubación, notará un crecimiento de placa gruesa de aproximadamente 10 mm de diámetro. Incubar la placa durante al menos 24 horas a 37 grados Celsius.
2. Inoculación de rayas de banda/línea – Dibuja una línea con una gran cantidad de inóculo, de unos 4 cm de largo. Comience en el borde que va al centro de la placa de agar. Incubar durante al menos 24 horas a una temperatura de 37 grados Celsius.

Nota: Si el medio que está utilizando no tiene un indicador, lo que debe hacer es poner una cantidad suficiente de ácido clorhídrico 1N. Deje que repose allí durante unos minutos para que el reactivo pueda absorberse completamente en la placa. Después de unos minutos, revise la placa sobre un fondo oscuro. ^{(7, 8 y 9)}

Interpretación de Resultados

Positivo

Un resultado positivo se caracteriza por un medio incoloro alrededor del organismo de prueba. Significa que el organismo que se está analizando tiene la capacidad de hidrolizar el ADN. Ejemplos de organismos positivos para la prueba de ADNasa son:

• Staphylococcus aureus
• Serratia marcescens
• M. Catarrhalis
• Algunas cepas de Campylobacter jejuni ^{(1, 10)}

Negativo

La prueba es negativa si el medio permanece del mismo color (verde). Simplemente significa que el organismo que se está probando no tiene la capacidad de hidrolizar el ADN. Los ejemplos son:

• Staphylococcus epidermidis
• Neisseria gonorrhoeae ^{(3, 5)}

Limitacion

• Algunas cepas de SARM no dan positivo para ADNasa.
• Algunos estafilococos que dan negativo en la prueba de coagulasa pueden dar como resultado reacciones débiles a la Prueba de ADNasa.
• Si está utilizando un medio que no contiene un indicador, debe agregar HCl 1N y el resultado debe interpretarse dentro de los cinco minutos posteriores a la aplicación. Interpretar el resultado después de cinco minutos puede alterar el resultado.
• Si está analizando bastoncillos gramnegativos, es mejor usar un medio verde de metilo.
• Si está analizando cocos grampositivos y Moraxella, debe evitar el uso de un inóculo bajo, ya que puede dar como resultado una lectura de falso negativo. Tales organismos no crecen bien en el medio. ^{(2, 5, 7 y 9)}

Referencia:

1. https://microbeonline.com/deoxyribonuclease-dnase-test-principle-procedure-results/
2. http://microbiologynotes.com/deoxyribonuclease-dnase-test-principle-uses-procedure-result-interpretation-quality-control-examples-and-limitations/
3. http://spot.pcc.edu/~jvolpe/b/bi234/lab/differentialMedia/DNaseTest.htm
4. http://microbesinfo.com/2014/12/dnase-test-deoxyribonuclease-test/
5. https://microbenotes.com/dnase-test-agar-principle-procedure-and-result-interpretation/
6. https://foodsafety.neogen.com/pdf/acumedia_pi/7129_pi.pdf
7. http://www.vumicro.com/vumie/help/Deoxyribonuclease_ (ADNasa)_Test.htm
8. https://www.thomassci.com/Laboratory-Supplies/Microbiological-Media/_/DNase-Test-Agar-with-Toluidine-Blue1
9. http://www.dalynn.com/dyn/ck_assets/files/tech/TD62.pdf
10. https://en.wikipedia.org/wiki/Deoxyribonuclease